宫颈癌相关成纤维细胞的分离与鉴定

• 作者: 侯文静 张梦真
• 来源期刊: 中华肿瘤防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 宫颈肿瘤 肿瘤相关成纤维细胞 原代细胞培养 肿瘤微环境
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究/论著
• 页码范围: 171-175
• 分类号: R737.33
• 语种: 中文

摘要

目的 宫颈癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast,CAF)在宫颈癌的进展中起着重要作用,原代成纤维细胞培养与体内微环境更为接近.本研究旨在分离纯化并鉴定CAF,初步探讨CAF的生物学特性.方法 选择郑州大学第一附属医院妇科2015-01-04-03-27收治的患者6例.用胶原酶消化法分离宫颈正常成纤维细胞(normal fibroblast,NF)和CAF;显微镜下观察细胞形态;用CCK-8法绘制生长曲线;ELISA法检测细胞上清中人转化生长因子β1(transforminggrowth factor betal 1,TGF-β1)的分泌水平;免疫荧光法及蛋白质印迹法检测细胞标志物波形蛋白(Vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)和成纤维细胞活化蛋白α(fibroblast activation protein α,FAPα).结果 CAF大小、形状不一,密度接触抑制消失;NF大小、形状一致,存在密度接触抑制.CAF的生长速度快于NF,z=-2.160,P=0.031.CAF中TGF-β1的浓度为(449.93±19.99) ng/L,而NF中为(209.50±16.25) ng/L,二者差异有统计学意义,z=-2.611,P=0.008.CAF高表达α-SMA和FAPα,而NF不表达α-SMA和FAPα,两者均表达Vimentin.结论 成功分离纯化并鉴定CAF.CAF具有平滑肌和成纤维细胞双重特性,其增殖能力及细胞活性均强于NF.