Beclin1进化保守区-SA融合蛋白偶联生物素-A10适配子制备PSMA靶向系统及其对前列腺癌细胞的抑制

• 作者: 刘家云 唐海斌 李卓 李蕊 苏明权 郝晓柯 马越云 高萌
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 链霉亲和素 Beclin1蛋白 进化保守区 融合蛋白 适配子A10 前列腺癌 凋亡 自噬
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 研究快报
• 页码范围: 161-167
• 分类号: R73-36+2|R737.25
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2016.02.002

摘要

目的:构建链霉亲和素(streptavidin,SA)与Beclin1进化保守区(evolutionary conserved district,ECD)融合蛋白原核表达载体,将融合蛋白与生物素-前列腺特异性膜抗原(prostate specific membrane antigen,PSMA)特异性适配子A10偶联制备PSMA靶向系统,鉴定其促进PSMA+前列腺癌细胞凋亡及自噬的功能.方法:采用基因合成技术获得融合基因SA-ECD,克隆至PUC57载体鉴定无误后,再将其定向插入原核表达载体PET30a,IPTG诱导融合蛋白表达,镍亲和凝胶层析柱纯化融合蛋白,Western blotting鉴定.按照生物素-A10∶ SA-ECD摩尔比为4∶1的比例制备PSMA特异性的偶联物即靶向系统,凝胶迁移阻滞实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)验证SA-ECD与生物素的结合,流式细胞术、Western blotting、锥虫蓝染色分别检测靶向系统对前列腺癌细胞凋亡、自噬相关蛋白表达和细胞活力的影响.结果:双酶切及基因测序证实重组质粒PET30a-SA-ECD构建成功,IPTG诱导SA-ECD融合蛋白在大肠杆菌中获得高效表达并经亲和凝胶层析成功纯化.EMSA实验证明SA-ECD能有效结合生物素-A10.靶向系统可促进PSMA+前列腺癌细胞凋亡和自噬,同时抑制癌细胞活力.结论:成功表达并纯化融合蛋白SA-ECD,构建的生物素-A10∶ SA-ECD靶向系统能够杀伤PSMA+前列腺癌细胞.