脂氟显微泡浓度和质粒浓度对基因转染效率影响的实验研究

• 作者: 何颖 卓忠雄
• 来源期刊: 临床超声医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 微泡 声孔效应 肝癌 转染
• 年，卷（期）: 2016,（7）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 433-437
• 页数: 5页
• 分类号: R445.1
• 字数: 4362字
• 语种: 中文

摘要

目的 研究脂氟显微泡浓度和质粒浓度对pcDNA6.2-GW/EmGFP重组质粒转染效率的影响,初步探索转染最佳条件及shRNA重组质粒对靶基因Survivin的抑制效果.方法 将重组质粒加入6个质粒浓度梯度组(5μl/ml、10 μl/ml、15μl/ml、20 μl/ml、25 μl/ml及30 μl/ml),向各组加入脂氟显微泡混悬液,设置6个微泡浓度梯度组(50 μl/ml、100 μl/ml、150 μl/ml、200 μl/ml、250 μl/ml及300 μl/ml),对两种变量进行6×6析因分析;空白对照组不加入微泡和质粒.应用超声治疗仪(1.2 W/cm2、占空比20％)辐照90s.48h后使用荧光显微镜及流式细胞仪检测细胞绿色荧光蛋白表达效率;台盼蓝染色计数并获得细胞死亡率.设立阳性重组质粒组和阴性重组质粒组,Western blot检测靶基因蛋白表达水平.结果 荧光显微镜下空白对照组未见绿色荧光蛋白表达,其他实验组绿色荧光蛋白表达量各不相同.流式细胞仪定量检测结果显示,与空白对照组比较,各实验组基因转染率均增加,差异有统计学意义(P＜0.05).当质粒浓度为20 μl/ml,微泡浓度为150 μl/ml时,基因转染效率最高.台盼蓝染色结果显示,质粒浓度一定时,高微泡浓度组(250 μl/ml、300 μl/ml)内细胞死亡率较低微泡浓度组(50 μl/ml、100 μl/ml)增多,差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot检测结果表明,阳性重组质粒组Survivin基因表达受到明显抑制.结论 超声联合微泡可以有效介导基因转染,当微泡浓度为150 μl/ml,质粒浓度为20 μl/ml时,基因转染率最高.阳性重组质粒可下调靶基因表达水平,为后续基因转染的相关研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卓忠雄	第三军医大学新桥医院超声科	57	275	8.0	12.0
2	何颖	第三军医大学新桥医院超声科	14	51	5.0	6.0