siRNA沉默MRP5基因对人肝癌细胞HepG2多药耐药性的影响

• 作者: 刘建平 刘波 张克韬 杨尚霖 苏正 韦金星
• 来源期刊: 中华肝脏外科手术学电子杂志
• 关键词: 癌,肝细胞 多药耐药相关蛋白质类 抗药性,肿瘤 核糖核酸酶类
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 124-128
• 页数: 5页
• 字数: 2916字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3877/cma.j.issn.2095-3232.2016.02.014

摘要

目的：探讨siRNA沉默多药耐药相关蛋白（MRP）5基因对人肝癌耐药细胞多药耐药性的影响。方法构建人肝癌耐药细胞HepG2/表柔比星（ADM），合成MRP5-siRNA片段，使用Lipofectamine 2000脂质体转染细胞。实验分3组，siRNA组为HepG2/ADM转染MRP5-siRNA，耐药组为HepG2/ADM细胞，普通组为肝癌细胞HepG2。MTT法检测细胞对化疗药物的敏感性，实时荧光定量RT-PCR检测MRP5基因mRNA相对表达量，Western blot法检测MRP5蛋白表达，流式细胞术检测细胞凋亡情况。多组比较采用单因素方差分析，两组间比较采用LSD-t检验或t检验。结果 siRNA组细胞对ADM、氟尿嘧啶（5-FU）和奥沙利铂（OXA）的半抑制浓度（IC50）分别为（0.180±0.008）、（1.657±0.014）、（0.055±0.007）mg/L，耐药组相应为（0.317±0.035）、（3.785±0.523）、（0.129±0.009）mg/L，普通组相应为（0.022±0.008）、（0.163±0.010）、（0.080±0.012）mg/L，耐药组对3种化疗药物的IC50明显高于普通组（t=14.202，11.993，13.937；P<0.05），siRNA组明显低于耐药组（LSD-t=-6.609，-7.044，-11.257；P<0.05）。siRNA组、耐药组、普通组细胞的MRP5 mRNA相对表达量分别为1.377±0.141、3.858±0.481、1.000±0.374，耐药组较普通组明显升高（LSD-t=9.600， P<0.05），siRNA组较耐药组明显降低（LSD-t=-11.669，P<0.05）。siRNA组、耐药组、普通组细胞MRP5蛋白灰度值分别为816、2245、58，耐药组较普通组明显增强，siRNA组较耐药组明显减弱。siRNA组细胞凋亡率为（25.1±3.7）%，明显高于耐药组的（3.3±0.7）%（t=9.950，P<0.05）。结论MRP5与人肝癌细胞的多药耐药性相关，siRNA沉默MRP5基因可以上调肝癌细胞对化疗药物的敏感性。