难提取细菌基因组DNA提取方法的比较与优化

• 作者: 刘文丽 安小平 程实 童贻刚 米志强 舒鹏
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 高通量测序 细菌基因组 DNA提取方法
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 412-415
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3954字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2016.03.025

摘要

目的:比较并优化2种试剂盒提取以巨型球菌为代表的难提取细菌基因组DNA的方法,以获得高质量的DNA用于高通量测序,探索高通量测序样品的前期处理方法.方法:用Life Technologies公司的ChargeSwitch gDNA Mini Bacteria Kit和Roche公司的High Pure PCR Template Preparation Kit提取制备困难的巨型球菌基因组DNA,然后通过添加溶葡球菌酶和增加溶菌酶、RNase A、Protein K的投入量及延长消化时间优化2个试剂盒,对4种方法提取的细菌基因组DNA进行浓度、纯度和基因组完整性测定,选取质量良好的基因组进行高通量测序.结果:改良后的2个试剂盒提取的巨型球菌DNA浓度较高,分别达到78.4和67.8 ng/μL,可满足高通量测序的需求,并获得基因组全序列.结论:改良后的2种方法是提取制备困难的巨型球菌基因组DNA更好的方法.