TNNI3K基因过表达诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化

• 作者: 叶珏 姚雨宏 徐瑞霞 李建军 王银 马春艳
• 来源期刊: 中国动脉硬化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 小鼠胚胎干细胞 肌钙蛋白Ⅰ相关激酶 心肌细胞
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 325-333
• 分类号: R363
• 语种: 中文

摘要

目的 研究肌钙蛋白Ⅰ相关激酶(TNNI3K)对小鼠胚胎干细胞(mESC)向心肌细胞分化的影响.方法 从形态和细胞免疫荧光、碱性磷酸酶试验以及HE染色鉴定mESC的多能性.采用悬滴法培养mESC形成拟胚体(EB),自分化为跳动的心肌细胞,通过细胞免疫荧光和透射电镜(TEM)方法鉴定.慢病毒分别携带hTNNI3K基因和siRNA感染mESC,并分别自分化为心肌细胞,通过流式细胞术(FCM)、细胞免疫荧光、Western blot等分析心肌特异性蛋白表达水平的差异.结果 mESC表面蛋白分子SSEA-1和Oct-4表达呈阳性(绿色),ALP试验呈蓝紫色,核质比＞＞1.正常自分化的细胞免疫荧光显示cTn Ⅰ、cTnT、MLC2以及α-actinin阳性(绿色),肌节清晰可见.TEM显示心肌细胞独有的肌纤维亚细胞结构.过表达组cTnT+阳性细胞率高于对照组,Western blot显示心肌特异性蛋白cTnT、cTn Ⅰ、MLC2、α-actinin等显著高于对照组,且细胞免疫荧光结果显示MHC6蛋白提前表达.干扰组不仅cTnT+阳性细胞率显著低于对照组,而且心肌特异蛋白也显著低于对照组,MHC6蛋白表达延后.结论 TNNI3K基因能增强心肌细胞的生成,促进mESC向心肌细胞的分化.