应用PCR技术快速检测熊蜂短膜虫

• 作者: 于师宇 刘蓓 张体银 张志灯 王武军 田国宁 白泉阳 郑腾
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 熊蜂短膜虫 PCR技术 内转录间隔区 熊蜂 检疫
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 简报
• 页码范围: 692-698
• 分类号: Q966
• 语种: 中文
• DOI: 10.16380/j.kcxb.2016.06.013

摘要

[目的]近年来,熊蜂作为温室作物的理想授粉者在国外已被广泛利用,并且获得很好的经济效益和生态效益,所以国外熊蜂经常被进口用于设施农业.熊蜂短膜虫Crithidia bombi是熊蜂的一种重要寄生虫病,一旦随进口熊蜂传入,将给国内熊蜂蜂群带来严重危害,因此迫切需要建立一种熊蜂短膜虫检测方法.[方法]基于熊蜂短膜虫基因内转录间隔区(internal transcribed space,ITS)基因序列设计了一对引物(Cri-F/R),建立了熊蜂短膜虫的PCR检测方法,并对退火温度、引物浓度和循环个数等反应条件进行了优化,同时验证了该PCR方法的灵敏性、特异性和稳定性.[结果]以熊蜂短膜虫ITS基因保守区设计特异性引物建立的熊蜂短膜虫PCR检测方法是可行的.优化的PCR反应条件为:退火温度59℃,引物浓度0.5 μmoL/L,扩增循环数35次.对感染熊蜂短膜虫的熊蜂总DNA的灵敏度达到13.24×10-5ng/μL,并具有良好的特异性和稳定性.将该方法应用于熊蜂短膜虫的检测,整个检测过程不超过4h,具有良好的适用性.[结论]研究建立了熊蜂短膜虫检测方法,能用于疫情监测和进境熊蜂的检验检疫.