PDGF-D 稳定沉默后对乳腺癌细胞 SK-BR-3生物学功能的影响

• 作者: 冯雯 奉典旭 李红昌 梅怡 殷佩浩 蒋一鸣 蔡含 陈亚峰 陈腾
• 来源期刊: 临床和实验医学杂志
• 关键词: 乳腺癌 血小板衍生生长因子 D 细胞增殖 迁移
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 203-210
• 页数: 8页
• 字数: 7625字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-4695.2016.03.002

摘要

目的：通过慢病毒载体沉默乳腺癌细胞系 SK - BR -3中血小板衍生生长因子 D（PDGF - D）基因的表达，探讨 PDGF - D 基因沉默后对乳腺癌细胞增殖、凋亡及迁移的调控作用。方法应用 RT - PCR 及蛋白质印迹方法检测5种乳腺癌细胞系中 PDGF - D 的表达状况；设计人 PDGF - D 基因的 shRNA 慢病毒载体，在293T 细胞中包装病毒并感染 PDGF - D 高表达的乳腺癌细胞系，运用蛋白质免疫印迹的方法鉴定其对 PDGF - D 基因的沉默效果；PDGF - D基因沉默后通过细胞增殖实验和软琼脂克隆形成实验检测其对细胞增殖能力的影响，并应用流式细胞技术检测细胞凋亡；运用 Transwell 迁移实验检测细胞的体外侵袭迁移能力。结果 PDGF - D 在5种细胞系中存在差异性表达，其中具有低转移潜能的 HT -29和 SK - BR -3细胞与具有高转移潜能的 LOVO、RKO 和 SW620细胞相比，具有更高的 PDGF -D 表达水平（ t ＝3.880，P ＜0.05）。选取低转移细胞株中 PDGF - D 表达相对较高的 SK - BR -3作为研究对象，构建PDGF - D shRNA 慢病毒载体沉默 SK - BR -3细胞中 PDGF - D 的表达，蛋白质免疫印迹结果提示，PDGF - D 稳定沉默的 SK - BR -3细胞系构建成功；在稳定沉默 PDGF - D 基因后，MTT 细胞增殖实验和软琼脂克隆形成实验表明 SK - BR-3细胞增殖能力增强（ F ＝75.23，P ＜0.001）；流式细胞技术检测显示 PDGF - D 基因沉默后可抑制 SK - BR -3细胞凋亡（ F ＝84.44，P ＜0.001）；细胞小室实验结果显示，PDGF - D 沉默后 SK - BR -3迁移能力增强（ F ＝155.9，P ＜0.001）。结论 PDGF - D 基因可能与乳腺癌的细胞增殖、凋亡与转移有关，进而参与了乳腺癌的发生、发展。