H7N9流感假病毒制备条件的优化及其在中和抗体检测中的初步应用

• 作者: 任皎 宋敬东 李善琴 王文玲 谭文杰 赵莉 阮力 黄保英 齐香荣
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒载体包装系统 H7N9流感病毒 假病毒 中和试验
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 348-353
• 页数: 6页
• 分类号: Q78|R392.1
• 字数: 5057字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2016.03.011

摘要

目的:优化A/Anhui/1/2013 (H7N9)流感假病毒的制备条件.方法:采用基于慢病毒载体的假病毒包装系统,通过对质粒组合方式、骨架质粒与包膜质粒配比、质粒复合物与转染试剂配比、换液时间点、维持液血清浓度、假病毒收获时间点等条件的探索,优化H7N9假病毒的包装条件;通过对4种假病毒纯化方案的比较,确定纯化方法;对纯化的假病毒进行Western印迹鉴定和电镜形态观察,了解其生物学特征;通过中和试验了解其在中和抗体检测中的应用情况.结果:假病毒包装条件优化结果表明,以血凝素(HA)与神经氨酸酶(NA)作为膜质粒,采用骨架质粒与膜质粒质量比3:1、质粒复合物与转染试剂质量体积比1:2混合,转染293FT细胞后10 h换含2％胎牛血清的维持液,培养48 h后收获上清,可高效获得流感假病毒AHop-H7N9pp;不同纯化方式获得的假病毒对感染H7N9的雪貂血清的中和抗体检测结果表明,假病毒纯化方法对中和抗体检测灵敏度的影响没有显著性差异;生物学特征分析显示,纯化的假病毒在电镜下具有典型的流感病毒形态,Western印迹能检测到HA和P24蛋白;多种流感疫苗小鼠血清中和试验结果表明该假病毒具有高度特异性,可用于H7N9中和抗体检测.结论:获得了包装有A/Anhui/1/2013 (H7N9)HA与NA的假病毒,并确定了高效制备H7N9假病毒的各条件参数,为基于H7N9流感假病毒的中和抗体检测平台的建立奠定了基础.