大鼠肾小球足细胞的原代培养及鉴定

• 作者: 张兆洲 张杰 戴恩来 杨静 薛国忠
• 来源期刊: 甘肃中医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 大鼠 肾小球 足细胞 原代培养 足细胞裂孔膜蛋白 Wilms瘤抑癌因子-1
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: R-331
• 语种: 中文
• DOI: 10.16841/j.issn1003-8450.2016.06.01

摘要

目的 建立一种操作相对简单、重复性较好的大鼠肾小球足细胞原代培养及鉴定的方法.方法 取SD乳鼠,无菌取肾,运用低浓度酶消化法、差异过筛法收集肾小球,将获得的肾小球种植于鼠尾胶原包被的25 cm2细胞培养瓶中,置于37℃、5％CO2恒温恒湿培养箱中孵育.通过倒置显微镜和扫描电镜观察足细胞形态,采用免疫组织化学法检测Wilms瘤抑癌因子-1(WT-1)和足细胞裂孔膜蛋白(Nephrin)的表达以鉴定足细胞.结果 种植第4天,可见大部分肾小球已贴壁,第5天见有细胞从贴壁的肾小球中爬出,第9天见约80％的细胞呈铺路石样融合生长.将种植后第9天的细胞消化传代培养,扫描电镜观察可见扁大而平、有树枝状突出的星形细胞.免疫组化结果显示足细胞标志蛋白Nephrin和WT-1表达阳性,表明所培养的细胞为足细胞.结论 本实验成功建立了一种操作简便、重复性较好的大鼠肾小球足细胞的分离、培养和鉴定方法,为进一步研究足细胞相关性肾脏疾病奠定了基础;WT-1和Nephrin可作为足细胞鉴定的标记蛋白.