重组人胱抑素C重链单域抗体的制备

• 作者: 刘海霞 徐根兴 朱月蓉 樊燕蓉 赵志杰
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: Cys C重链单域抗体 大肠杆菌 包涵体 Ni-NTA亲和层析 复性 血清 胶乳增强免疫比浊法
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 377-380
• 页数: 4页
• 分类号: Q51|Q78
• 语种: 中文

摘要

研究在大肠杆菌中表达重组人胱抑素C(Cystatin C,Cys C)重链单域抗体(Variable domain of the heavy chain of heavy-chain antibody,VHH),经纯化和复性后,建立测定人血清Cys C的胶乳增强免疫比浊法(Particle enhanced turbidimetric immunoassay,PETIA).根据大肠杆菌编码蛋白的特性设计Cys C重链单域抗体编码基因序列,人工合成目的基因克隆至PET32a(+)载体中,构建重组人Cys C重链单域抗体原核表达质粒PET32a(+)-Cys C重链单域抗体,测序鉴定正确后转入大肠杆菌BL21中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,所获得的目的抗体经Ni-NTA亲和层析法进行纯化,通过稀释复性,SDS-PAGE鉴定其纯度.Cys C重链单域抗体化学偶联胶乳颗粒,建立PETIA法测定人血清Cys C.SDS-PAGE电泳分析显示,表达的Cys C重链单域抗体相对分子质量约为53 k,经Ni-NTA亲和层析法纯化后抗体纯度达90％以上,复性回收率为60％左右.用Cys C重链单域抗体建立的测定人血清Cys C的PETIA,能检测到血清中的Cys C含量.成功构建Cys C重链单域抗体原核表达系统并获得了有活性的Cys C重链单域抗体,该抗体可用于建立测定Cys C的PETIA法,为下一步开发Cys C的免疫检测试剂盒奠定了基础.