抗CD133纳米抗体的分离与鉴定

• 作者: 冯亚宁 李江伟 李玲霞 翟田甜 马晓玲
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: CD133 纳米抗体 天然噬菌体展示文库 亲和筛选 ELISA
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 开发与应用
• 页码范围: 87-92
• 页数: 6页
• 分类号: Q784
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2016.01.016

摘要

[目的]获得骆驼来源的与人CD133抗原特异性结合的纳米抗体.[方法]从3峰新疆双峰驼外周血中分离淋巴细胞,采用巢式PCR扩增获得cDNA并构建VHH天然噬菌体展示文库.包被CD133-606于ELISA板,对天然文库进行3轮亲和筛选,菌落PCR和基因测序确定能结合CD133的候选克隆.挑选重复序列VHH克隆构建到pET28a并转BL21用IPTG诱导表达.IMAC方法纯化重组VHH抗体蛋白,Western Blot和ELISA检测与CD133的抗原结合性.[结果]从109淋巴细胞中构建了库容为1.4×109cfu的噬菌体展示文库,Western Blot及ELISA结果显示重复4次核苷酸序列的VHH-13的纳米抗体能与CD133-606有较好的结合活性.[结论]通过对VHH天然展示文库的亲和筛选及鉴定,成功获得了能与人重组CD133胞外区特异结合的纳米抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马晓玲		10	16	2.0	4.0
2	李江伟		25	65	5.0	7.0
3	翟田甜		3	11	2.0	3.0
4	李玲霞		2	2	1.0	1.0
5	冯亚宁		2	1	1.0	1.0