原文服务方: 中国抗生素杂志       
摘要:
目的 在毕赤酵母中表达HSV-1复制的关键酶——碱性脱氧核糖核酸酶(alkaline deoxyribonuclease,AN),检测其核酸外切酶活性,从而进一步研究AN的抑制剂.方法 以GenBank发表的HSV-1的17株UL12基因为模板,在不改变UL12氨基酸序列的情况下选择毕赤酵母偏好密码子,设计合成新的基因UL12-2,定向克隆进毕赤酵母表达载体pPIC9K中,经酶切和测序鉴定证明重组载体构建成功.线性化的重组载体pPIC9K-UL12-2,电转化至毕赤酵母菌GS115,用组氨酸缺陷平板选择His+转化子,并进行表型测定,筛选出高抗性转化子.采取甲醇诱导表达,对诱导表达96h的上清进行离子交换层析,SDS-PAGE检测经纯化的AN,并对AN进行核酸外切酶活性检测.结果 重组质粒pPIC9K-UL12-2在GS115中成功分泌表达,表达产物纯化后经SDS-PAGE检测可见目的蛋白条带,目的蛋白显示出核酸外切酶活性.结论 毕赤酵母成功表达了具有核酸外切酶活性的碱性核酸酶AN,为抗HSV-1新药的研发奠定了基础.
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文献信息
篇名 HSV-1碱性脱氧核糖核酸酶AN在毕赤酵母中的表达、纯化和活性鉴定
来源期刊 中国抗生素杂志 学科
关键词 HSV-1 UL12基因 AN 毕赤酵母 酶活性
年,卷(期) 2016,(4) 所属期刊栏目 遗传育种与生物合成
研究方向 页码范围 261-266
页数 6页 分类号 R978.1
字数 语种 中文
DOI
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 张燕 成都医学院病原生物学教研室 11 151 4.0 11.0
2 陈恬 成都医学院病原生物学教研室 23 70 5.0 7.0
3 王永洪 成都医学院病原生物学教研室 4 16 3.0 4.0
4 兰婉莹 成都医学院病原生物学教研室 4 16 3.0 4.0
5 张文秋 四川大学华西药学院 5 1 1.0 1.0
6 胡金 成都医学院病原生物学教研室 1 0 0.0 0.0
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节点文献
HSV-1
UL12基因
AN
毕赤酵母
酶活性
研究起点
研究来源
研究分支
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相关学者/机构
期刊影响力
中国抗生素杂志
月刊
1001-8689
51-1126/R
大16开
1976-01-01
chi
出版文献量(篇)
4459
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