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HSV-1碱性脱氧核糖核酸酶AN在毕赤酵母中的表达、纯化和活性鉴定
HSV-1碱性脱氧核糖核酸酶AN在毕赤酵母中的表达、纯化和活性鉴定
作者:
兰婉莹
张文秋
张燕
王永洪
胡金
陈恬
原文服务方:
中国抗生素杂志
HSV-1
UL12基因
AN
毕赤酵母
酶活性
摘要:
目的 在毕赤酵母中表达HSV-1复制的关键酶——碱性脱氧核糖核酸酶(alkaline deoxyribonuclease,AN),检测其核酸外切酶活性,从而进一步研究AN的抑制剂.方法 以GenBank发表的HSV-1的17株UL12基因为模板,在不改变UL12氨基酸序列的情况下选择毕赤酵母偏好密码子,设计合成新的基因UL12-2,定向克隆进毕赤酵母表达载体pPIC9K中,经酶切和测序鉴定证明重组载体构建成功.线性化的重组载体pPIC9K-UL12-2,电转化至毕赤酵母菌GS115,用组氨酸缺陷平板选择His+转化子,并进行表型测定,筛选出高抗性转化子.采取甲醇诱导表达,对诱导表达96h的上清进行离子交换层析,SDS-PAGE检测经纯化的AN,并对AN进行核酸外切酶活性检测.结果 重组质粒pPIC9K-UL12-2在GS115中成功分泌表达,表达产物纯化后经SDS-PAGE检测可见目的蛋白条带,目的蛋白显示出核酸外切酶活性.结论 毕赤酵母成功表达了具有核酸外切酶活性的碱性核酸酶AN,为抗HSV-1新药的研发奠定了基础.
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篇名
HSV-1碱性脱氧核糖核酸酶AN在毕赤酵母中的表达、纯化和活性鉴定
来源期刊
中国抗生素杂志
学科
关键词
HSV-1
UL12基因
AN
毕赤酵母
酶活性
年,卷(期)
2016,(4)
所属期刊栏目
遗传育种与生物合成
研究方向
页码范围
261-266
页数
6页
分类号
R978.1
字数
语种
中文
DOI
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单位
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G指数
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张燕
成都医学院病原生物学教研室
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陈恬
成都医学院病原生物学教研室
23
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3
王永洪
成都医学院病原生物学教研室
4
16
3.0
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4
兰婉莹
成都医学院病原生物学教研室
4
16
3.0
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张文秋
四川大学华西药学院
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胡金
成都医学院病原生物学教研室
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AN
毕赤酵母
酶活性
研究起点
研究来源
研究分支
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期刊影响力
中国抗生素杂志
主办单位:
中国医药集团总公司四川抗菌素工业研究所
出版周期:
月刊
ISSN:
1001-8689
CN:
51-1126/R
开本:
大16开
出版地:
邮发代号:
创刊时间:
1976-01-01
语种:
chi
出版文献量(篇)
4459
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