摘要:
目的 探讨旋转式细胞组织培养系统(RCCS)模拟微重力对小鼠肝Kupffer细胞增殖及相关基因表达的影响.方法 应用RCCS建立模拟微重力细胞培养系统.将小鼠肝原代Kupffer细胞随机分为模拟微重力组(SMG)和正常重力组(NG).分别于培养第3、5、7天收获细胞.采用血球计数板进行细胞计数,流式细胞仪检测细胞周期,实时荧光定量PCR测定PCNA、Ki-67、ERK、CDK2以及CyclinB基因表达水平.结果 培养第3天时,SMG组细胞计数明显低于NG组(2.6±0.1比3.1±0.2,P<0.05),培养第5、7天SMG组明显高于NG组(6.9±0.4比5.9±0.2,P<0.05;8.4±0.3比6.5±0.3,P<0.05).流式细胞仪检测结果显示,培养第3天SMG组G0/G1期比例明显高于NG组(78.1±0.2比59.7±1.2,P<0.05),S期、G2/M期比例明显低于NG组(12.0±0.4比27.6±0.9,P<0.05;9.9±0.3比12.7 ±0.4,P<0.05);培养第5天,SMG组G0/G1期比例低于NG组(69.5±1.5比74.8±0.7,P<0.05),S期、G2/M期比例高于NG组(21.2±1.5比17.3±0.4,P<0.05;9.3 ±0.4比7.9±0.4,P<0.05);培养第7天,SMG组G0/G1期比例依然低于NG组(73.9±1.9比81.7±1.3,P<0.05),S期、GJM期比例亦高于NG组(18.9±1.9比12.1±0.8,P<0.05;7.3±0.2比6.2±0.6,P<0.05).实时荧光定量PCR结果显示,与NG组相比,SMG组PCNA、Ki-67、ERK、CDK2以及CyclinB基因表达在培养3天时均下调,第5和7天呈现明显上调趋势.结论 在RCCS模拟失重应激损伤期,小鼠肝Kupffer细胞增殖功能受到抑制,以后Kupffer细胞增殖能力在相关基因的参与调节下得以恢复并被激活强化.