腺病毒介导人TGF-β1基因转染自体腘绳肌腱重建兔前交叉韧带术后的表达

• 作者: 何敏 杨俊涛 洪亮 王晓旭 谭光华 谭文甫
• 来源期刊: 中国修复重建外科杂志
• 关键词: 人TGF-β1 腺病毒 腘绳肌腱 前交叉韧带 兔
• 年，卷（期）: 2016,（10）
• 所属期刊栏目: 骨与关节修复重建
• 页码范围: 1233-1237
• 页数: 5页
• 语种: 中文
• DOI: 10.7507/1002-1892.20160252

摘要

目的 检测腺病毒介导人TGF-β1(human TGF-β1,hTGF-β1)基因转染至胭绳肌腱重建兔前交叉韧带(anterior cruciate ligament,ACL)术后不同时间点的表达.方法 以DMEM培养基稀释重组腺病毒载体Ad-hTGF-β1与腺病毒空载体Ad-绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP),使病毒滴度为5×108 PFU/mL.取15～20月龄雄性新西兰大白兔48只,随机分为A、B、C3组(n=16),以兔双侧后肢膝关节为研究对象,取自体胭绳肌腱重建同侧ACL,重建前A、B组腘绳肌腱分别以Ad-hTGF-β1及Ad-GFP转染12h,C组以DMEM培养作为对照组.转染后12h应用荧光显微镜观察A、B组绿色荧光表达,ELISA法检测A组胭绳肌腱中TGF-β1蛋白表达量.术后2、4、6、8周取材,应用实时荧光定量PCR及Western blot法检测腘绳肌腱中hTGF-β1基因及蛋白表达.结果 A、B组胭绳肌腱经转染后均可见绿色荧光表达;ELISA法检测示,A组胭绳肌腱中TGF-β1蛋白表达量为(221.0±12.2) ng/mL.实时荧光定量PCR检测示,术后各时间点B、C组均未能检测到hTGF-β1mRNA表达;术后2、4、6、8周,A组hTGF-β1 mRNA相对表达量逐渐下降,分别为1.004±0.072、0.785±0.038、0.469±0.053、0.172±0.021,各时间点间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).Western blot检测示,术后各时间点B、C组TGF-β1蛋白条带均为弱阳性,A组TGF-β1蛋白表达量均显著高于B、C组(P＜0.05),B、C组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).A组TGF-β1蛋白表达量随时间延长逐渐降低,各时间点间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 在腺病毒载体介导下,hTGF-β1基因能成功转染至腘绳肌腱并能在ACL重建术后有效表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨俊涛		25	29	3.0	3.0
2	谭文甫		50	126	7.0	9.0
3	谭光华		32	67	5.0	6.0
4	王晓旭		42	172	8.0	11.0
5	洪亮		8	7	2.0	2.0
6	何敏		8	10	2.0	3.0