稳定过表达XAF1基因鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞株的构建

• 作者: 曲颂 朱小东 李龄 林欢 武江波 苏芳 莫柒艳 陈龙
• 来源期刊: 中国癌症防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 鼻咽肿瘤 X连锁凋亡抑制蛋白相关因子1 慢病毒载体 鼻咽癌放射抗拒细胞 基因转染 荧光效率
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 349-353
• 页数: 5页
• 分类号: R739.63
• 字数: 3454字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-5671.2016.06.03

摘要

目的：构建稳定过表达X连锁凋亡抑制蛋白相关因子1（ X-linked inhibitor of apoptosis associated factor 1，XAF1）基因的鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞株。方法分别将携带XAF1基因感染复数（ multiplicity of infection，MOI）为50的慢病毒稀释液、MOI为100的慢病毒原液和MOI为100的慢病毒原液加入终浓度为5μg/mL的聚凝胺（ polybrene）转染人鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞株。通过倒置荧光显微镜观察细胞内荧光数量及强度评判转染效率，通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（ real-time quantitative reversetranscription polymerase chain reaction，qRT-PCR）和蛋白免疫印记法（ western blot）检测XAF1基因mRNA和蛋白的表达。结果慢病毒稀释液转染，约60％的细胞可观察到微弱荧光；慢病毒原液转染，约70％的细胞观察到较弱荧光；慢病毒原液加入5μg/mL polybrene的转染效率较高，约90％的细胞观察到较强荧光。嘌呤霉素筛选上述转染效率最高的慢病毒原液加5μg/mL polybrene组细胞，其成功将携带XAF1基因的慢病毒转入鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞株。 qRT-PCR和western blot进一步证实细胞株稳定过表达XAF1基因。结论慢病毒加polybrene转染可成功构建稳定过表达XAF1基因的鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞株。