稳定表达人IFITM3的A549细胞株建立及其对禽流感病毒感染的抑制作用

• 作者: 姜颖越 曹婷婷 朱羿龙 李太元 李文杰 李昌 李艳茹 杜寿文 王茂鹏 谭鹏 赵飞 辛舒 金宁一
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 干扰素诱导跨膜蛋白3 稳定表达 禽流感病毒 抑制作用
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 372-376,381
• 页数: 6页
• 分类号: S855.3
• 字数: 3989字
• 语种: 中文

摘要

目的：为深入研究IFITM3抗禽流感病毒作用及其分子机制提供细胞模型，建立稳定表达人IFITM3蛋白的A549细胞株。方法：首先合成引物，分离人外周血单个核细胞，PCR扩增IFITM3基因，进行DNA测序分析。测序正确后，将其克隆至慢病毒表达载体pLV－Puro中构建真核表达质粒pLV－IFITM3，转染A549细胞，在确定IFITM3可表达后，利用嘌呤霉素加压筛选稳定表达IFITM3的细胞株，通过荧光定量PCR和Western blot 方法对获得的稳定细胞株进行鉴定，同时分析IFITM3蛋白在稳定细胞株的分布及其对细胞活性的影响。最后，基于建立的稳定细胞株，用H5N1亚型禽流感病毒作为病毒测试模型，对IFITM3的抗病毒活性进行了初步评价。结果：成功获得人外周血单个核细胞源IFITM3基因，构建了重组慢病毒表达质粒，并通过质粒转染结合嘌呤霉素压力筛选获得稳定表达IFITM3的A549细胞，且IFITM3主要分布在膜组分上，并对细胞活性无显著影响，同时IFITM3可抑制H5N1亚型禽流感病毒感染。结论：成功获得稳定表达IFITM3的A549细胞，证明了IFITM3可抑制H5N1亚型禽流感病毒感染，为进一步深入探讨IFITM3限制流感病毒感染的作用机制和分子机理提供了细胞模型和实验基础。