播娘蒿转录因子DsCBF1突变体的构建及其蛋白质的EMSA试验分析

• 作者: 乔代蓉 刘博 常菲菲 徐辉 李茜 田磊 陈天盈 陈麒名
• 来源期刊: 应用与环境生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 播娘蒿 CRT/DR元件 AP2区域 重叠延伸PCR pET32a-DsCBF1突变体 EMSA
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 179-183
• 页数: 5页
• 分类号: Q945.78|Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1145.2015.05015

摘要

CBF(C-repeat binding factor)是调控植物冷驯化相关基因表达的调控转录激活因子,可与下游冷应答基因启动子的核心序列CBT/DRE元件(CCGAC)特异性地结合,启动耐寒基因的表达,提高植物的抗寒能力.为揭示播娘蒿(Descurainia sophia)的抗寒机制,研究播娘蒿转录因子DsCBF1蛋白AP2区域编码氨基酸对启动下游抗寒基因表达的作用.首先分析DsCBF1蛋白AP2区域编码氨基酸的疏水性,设计重叠延伸PCR引物,定点突变DsCBF1基因;然后构建pET32a-DsCBF1突变体原核表达载体,通过冻融法转化入宿主大肠杆菌BL21(DE3)中,进行原核表达,并通过镍离子亲和层析纯化DsCBF1突变体蛋白;最后利用化学发光法EMSA试验(Electrophoretic mobility shift assay)方法分析DsCBF1蛋白与含有CR T/D RE元件的DNA探针之间的相互作用.EMSA试验分析显示,播娘蒿DsCBF1的AP2区域的57位苯丙氨酸F(TTT)和68位缬氨酸V(GTT)分别突变为精氨酸R(CGT)和谷氨酸E(GAA),导致播娘蒿顺式调控因子DsCBF1蛋白与下游冷响应基因的CRT/DRE元件结合效率出现明显下降趋势,说明播娘蒿DsCBF1蛋白AP2区域编码氨基酸位点的突变影响了播娘蒿的抗寒能力.本研究表明播娘蒿DsCBF1的AP2区域的57位苯丙氨酸F(TTT)和68位缬氨酸V(GTT)位点对于播娘蒿的冷驯化具有十分重要的作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐辉		32	82	4.0	9.0
2	李茜		104	421	9.0	17.0
3	乔代蓉		72	604	13.0	24.0
4	刘博		24	95	5.0	9.0
5	田磊		5	4	1.0	2.0
6	陈麒名		2	0	0.0	0.0
7	陈天盈		3	0	0.0	0.0
8	常菲菲		2	0	0.0	0.0