钠通道 SCN5a 突变体 R104W 的构建及验证

• 作者: 杜媛 王亭忠 王娅 王娟娟 胡培静 陈春燕 马爱群
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 钠通道 R104W 突变 Brugada 综合征 定点诱变
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 435-438,443
• 页数: 5页
• 分类号: R541.7
• 语种: 中文
• DOI: 10.7652/jdyxb201504002

摘要

目的：构建并验证 Brugada 综合征相关钠通道 SCN5a 基因 R104W 突变体。方法采用一步法 PCR 突变技术,以 pEGFP-SCN5a 为模板,体外定点诱变构建 pEGFP-SCN5a-R104W 突变体,进行基因测序,并用 Lipofectamine TM3000脂质体转染法转入 HEK293细胞,通过 Western blotting 和膜片钳记录检测蛋白质表达和电流加以验证。结果测序结果显示 SCN5a-R104W 突变体基因序列上第310 C>T,其他序列碱基与野生型相比未发生改变；West-ern blotting 结果显示 SCN5a-R104W 突变体蛋白表达量较野生型 SCN5a 降低；荧光显微镜下显示 SCN5a-R104W 突变体蛋白位于胞质内；SCN5a-R104W 突变体转染后膜片钳记录未能检测到钠电流,且 R104W 突变体对野生型通道有负显性抑制作用。结论成功构建并验证 SCN5a 基因 R104W 突变体。