心脏传导阻滞SCN5A基因L1001Q突变体构建和功能研究

• 作者: 史瑞明 周熙惠 惠智艳 李溪 梁潇 肖丹丹 高锦伟
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 钠通道 SCN5A 心脏传导阻滞 膜片钳 基因突变 基因表达载体
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 593-597,616
• 分类号: R541.7
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8259.2012.05.014

摘要

目的 对作者发现的一个中国3代人心脏传导阻滞家系SCN5A基因新突变L1001Q,构建突变表达载体,利用分子生物学方法和全细胞膜片钳技术观察L1001Q突变的功能.方法 一步定点诱变法构建pEGFP-L1001QSCN5A突变体;激光共聚焦和Western blotting技术检测突变蛋白定位和表达;全细胞膜片钳技术观察突变体钠电流.结果 野生型和L1001Q突变均表达在细胞膜上,且表达量无明显变化.二者最大激活电流分别为(148.34±0.77) pA/pF和(132.59±0.96)pA/pF(P＞0.05),L1001Q突变半失活电压V1/2为(-73.25±0.87)mV,较野生型正向转移约3.5 mV[V1/2为(-76.71±0.73)mV,P＜0.05],L1001Q突变失活后恢复时间常数较野生型稍减小,差异无统计学意义(WT tau=16.8 ms,L1001Qtau=14.1ms,P＞0.05).结论 L1001Q突变未影响钠通道蛋白的表达和转运,主要通过改变钠通道门控特性引起钠通道功能减弱进而导致心脏传导阻滞.