整合子相关元件多重PCR检测技术建立及其在弧菌中应用

• 作者: 刘旭 房文红 李健 王元 赵姝 马立才
• 来源期刊: 上海海洋大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 多重PCR 整合子 SXT ISCR1 弧菌
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 水产生物技术
• 页码范围: 814-821
• 分类号: S917
• 语种: 中文
• DOI: 10.12024/jsou.20160301675

摘要

为了建立一种能同时检测1类整合子、4类超级整合子和1型插入序列共同区的多重PCR检测方法,根据GenBank中1类整合子整合酶基因int1、4类超级整合子整合酶基因intsxT和1型插入序列共同区转座酶基因ISCR1的序列,应用PrimerPlex 2.61设计3对特异性引物,通过改变引物浓度和退火温度对多重PCR体系进行了优化.此后,评价了所建立多重PCR体系的特异性和灵敏度,并应用于222株海水养殖源弧菌中3种整合子相关元件的检测.结果显示,设计的3对引物能分别单独且特异性地扩增出569 bp、430 bp和651 bp的目的条带;当int1、intsxT和ISCR13对引物(10 pmol/μL)的体积依次为0.3 μL、0.6 μL和0.6 μL,退火温度为50℃时,多重PCR体系能特异性地扩增出3个条带清晰、区分度良好的目的条带,方法的灵敏度达到0.02 ng/μL弧菌基因组模板DNA;利用所建立的方法对222株临床分离弧菌进行3种整合子元件检测得到的结果与文献报道的单引物检测结果一致.从上述研究结果可以看出,该多重PCR方法能快速准确地检测Int1、SXT和ISCR1,适用于整合子相关元件流行监测及整合子相关的耐药性研究.