传染性喉气管炎病毒gD蛋白多克隆抗体制备与运用

• 作者: 刘胜旺 张晓彩 张雪梅 赵妍
• 来源期刊: 东北农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: ILTV gD蛋白 原核表达与纯化 真核表达 多克隆抗体 细胞定位
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 69-75,97
• 页数: 8页
• 分类号: S852.65+9.1
• 字数: 4835字
• 语种: 中文

摘要

鸡传染性喉气管炎（Infectious laryngotracheitis， ILT）是由传染性喉气管炎病毒（Infectious laryngotracheitis virus，ILTV）引起的一种急性接触性上部呼吸道病。ILTV表面糖蛋白gD能刺激机体产生良好体液和细胞免疫应答，编码该蛋白的gD基因是ILTV主要抗原性基因之一。以ILTV-LJS09株基因组为模板，PCR扩增gD基因主要抗原区域（54~344 aa）及gD基因，分别亚克隆至pGEX-6P-1和pCAGGS载体，构建原核表达载体pGEX-6P-1-gD163/1032和真核表达载体pCAGGS-gD。利用纯化ILTV、原核表达纯化获得重组蛋白r-gD和真核质粒pCAGGS-gD，对新西兰大白兔进行免疫与加强免疫，制备兔抗ILTV gD多克隆抗体。通过间接免疫荧光试验确定ILTV gD多克隆抗体和ILTV感染的鸡肝癌细胞表达蛋白发生反应，表明制备的ILTV gD多克隆抗体能识别ILTV天然抗原表位，最佳稀释度为1??1000；用ILTV感染的LMH细胞培养物进行Western Blot分析，在40 ku左右出现一条特异性条带，与预期ILTV gD蛋白大小相符。激光共聚焦定位感染鸡肝癌细胞中ILTV gD蛋白，发现ILTV gD蛋白主要表达于感染细胞胞浆及融合细胞交界处。