影响内标双重PCR靶模板检测灵敏度的因素分析

• 作者: 姜文灿 岳素文 梁爽 江洪 王成彬 苑晓舟 葛素君
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 双重PCR 引物二聚体 内标系统
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 临床检验技术研究
• 页码范围: 244-246
• 页数: 3页
• 分类号: R446.19
• 字数: 2913字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13602/j.cnki.jcls.2016.04.02

摘要

目的 在内标双重PCR系统中寻找影响靶模板检测灵敏度的主要因素,并比较不同检测体系的灵敏度.方法 针对HBV基因设计普通引物对和中部同序引物对,比较引物二聚体(PD)含量;控制内标基因的Ct值约为30,调整内标引物浓度为10、8、5、2、1 μmol/L,比较不同体系的检测灵敏度;控制内标引物的用量不变,分别测定内标基因Ct值在15、20、25、30时的靶模板检测灵敏度.结果 中部同序引物PD的Ct值在35以上,普通引物对PD的Ct值在30～33之间;10、8、5、2、1 μmol/L浓度的内标引物需要内标模板的浓度分别为5×104、5×104、5×104、5×105、5×107 IU/mL;不同内标引物用量检测灵敏度均为5×103 IU/mL,仅使用中部同序引物的单重PCR检测灵敏度为5×102 IU/mL;内标Ct值在15、20、25、30时靶模板检测的灵敏度分别为5×105、5×104、5×103、5×103 IU/mL.结论 在双重PCR检测体系中,对靶模板检测灵敏度影响最大的因素为内标的模板量,仅使用中部同序引物对的单重PCR具有最高的灵敏度.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梁爽	中国人民解放军总医院临检科	24	139	6.0	11.0
2	岳素文		4	19	3.0	4.0
3	江洪		5	20	3.0	4.0
4	苑晓舟	中国人民解放军总医院临检科	4	14	1.0	3.0
5	王成彬	温州医科大学检验医学院生命科学学院	5	10	2.0	3.0
6	姜文灿	温州医科大学检验医学院生命科学学院	2	8	1.0	2.0
7	葛素君	温州医科大学检验医学院生命科学学院	1	1	1.0	1.0