Apak稳定敲除细胞系的建立及其p53活性和凋亡水平的变化

• 作者: 梅兴沙 王建 田春艳 郑惠珍
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 慢病毒属 Apak CRISPR/Cas9 敲除 基因,p53 质粒 凋亡 克隆形成
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 299-303
• 页数: 5页
• 分类号: Q71
• 字数: 4501字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2016.04.008

摘要

目的：利用CRISPR／Cas9慢病毒系统在人结肠癌细胞（ HCT116细胞）中建立稳定及永久性Apak敲除细胞系，检测Apak敲除后细胞部分生物学活性、p53活性和凋亡水平的变化。方法构建lentiCRISPR v2－sgRNA Apak敲除质粒，进行慢病毒包装，感染HCT116细胞，嘌罗霉素筛选出阳性克隆。通过蛋白质免疫印迹检测Apak蛋白水平，筛选得到Apak稳定敲除细胞系。分别通过报告基因实验、流式细胞术和克隆形成实验测定Apak稳定敲除细胞系中p53活性、细胞凋亡率和克隆形成能力。结果通过测序证明lentiCRISPR v2－sgRNA Apak敲除质粒正确，蛋白质免疫印迹证实Apak敲除细胞系中Apak表达缺失。在Apak敲除细胞系中p53的转录活性增强，Apak敲除细胞凋亡增加、克隆形成能力降低。结论获得Apak稳定敲除细胞系，便于后期Apak功能的研究。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑惠珍		23	222	11.0	14.0
2	梅兴沙		1	2	1.0	1.0