1型鸭甲肝病毒VP3蛋白的抗血清中和活性分析及B细胞表位鉴定

• 作者: 刘菲 刘马峰 朱德康 杨乔 汪铭书 沈友林 程安春 贾仁勇 陈舜
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 1型鸭甲肝病毒 VP3蛋白 多克隆抗体 中和活性 B细胞表位
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 141-148
• 页数: 8页
• 分类号: S858.325.3|S852.659.6
• 字数: 5401字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2016.01.019

摘要

旨在探究1型鸭甲肝病毒(DHAV-1)VP3蛋白抗血清的中和活性并鉴定VP3的线性B细胞表位.利用pGEX-4T-1表达载体,在BL21(DE3)宿主菌中原核表达DHAV-1 VP3基因,以切胶纯化出的蛋白质为抗原免疫兔制备多克隆抗体,通过鸡胚中和试验对多抗的中和效价进行检测;采用Karplus&Schulz、Emini、Jameson-Wolf和Parker方法分别对柔韧性、表面可及性、抗原性及亲水性进行分析,得到了4条候选线性B细胞表位,以制备的兔抗VP3多克隆抗体为一抗,通过间接ELISA方法对人工合成的B细胞表位进行鉴定,并进一步用临床鸭血清样品对鉴定的B细胞表位的抗体检测能力进行评估.结果显示,VP3在BL21 (DE3)中以包涵体形式表达,大小约54ku,Western blot分析表明重组蛋白质具有较好的反应原性.制备的兔抗VP3多克隆抗体的琼扩效价达到1:16,并能中和DHAV-1,中和效价为1: 39;利用间接ELISA鉴定出GKRKPCRRPIHKPKNPPQEP(1-20 aa)、FNT-GRYQMSWYPIADGEQSL(131-150 aa)和VNSSAPSNID(200-209 aa)为VP3的B细胞表位,抗体检测能力试验结果显示表位肽可检测临床DHAV-1鸭血清.本研究表明DHAV-1 VP3的抗血清具备一定的中和活性,1-20aa、131-150 aa和200-209 aa为VP3的B细胞表位且具有临床应用前景.