痘苗生长因子和胸苷激酶双基因缺失表达双荧光溶瘤痘病毒的构建及其对胰腺癌细胞的杀伤作用

• 作者: 于峰 刘黎琼 周冲 周改 夏瑜 张尤历 徐岷 施海峰
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 溶瘤痘病毒 胰腺癌 免疫治疗
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 143-146,153
• 页数: 5页
• 分类号: R393
• 字数: 3632字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13312/j.issn.1671-7783.y150284

摘要

目的:构建痘苗生长因子(vaccinia growth factor,VGF)和胸苷激酶(thymidine kinase,TK)双基因缺失同时表达绿色荧光蛋白(GFP)和DsRed双荧光的溶瘤痘病毒,并研究其对胰腺癌细胞的杀伤作用.方法:在病毒TK基因处利用同源重组方法将病毒晚期启动子F17R调控的GFP基因和早晚期启动子SEL调控的DsRed基因克隆入缺失VGF基因的VSC20亲本病毒,构建同时缺失VGF和TK双基因的重组溶瘤痘病毒vvDD-GFP-DsRed.同时利用CCK-8法和结晶紫染色法检测该病毒对胰腺癌细胞Patu8988和BxPC-3的杀伤作用.结果:通过同源重组和软琼脂筛选获得vvDD-GFP-DsRed重组溶瘤痘病毒.CCK-8法结果显示,与MOI=0相比,MOI分别为1,10时,vvDD-GFP-DsRed对Patu8988细胞和BxPC-3细胞具有明显的杀伤作用,且在此范围内随MOI值增加杀伤效果逐渐增强(P均＜0.05).与MOI=0相比,Patu8988细胞在MOI为0.01时存活率低(P＜0.05),且在结晶紫染色法测定中形成了明显的空斑.结论:成功构建vvDD-GFP-DsRed重组溶瘤痘病毒,其对胰腺癌细胞具有明显的杀伤作用.