马氏珠母贝外套膜不同区域基因组DNA甲基化MSAP分析

• 作者: 焦钰 王庆恒 罗少杰 邓岳文 郑哲
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 马氏珠母贝 外套膜 MSAP技术 DNA甲基化 表达调控
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1227-1235
• 页数: 9页
• 分类号: S96
• 字数: 5626字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1118.2016.16077

摘要

通过甲基化敏感多态性扩增(methylation-sensitive amplification polymorphism, MSAP)技术,检测马氏珠母贝(Pinctada martensii)外套膜的边缘膜区(mantle edge, Me)、套膜区(mantle pallial, Mp)和中央膜区(mantle central, Mc)的基因组DNA甲基化修饰水平；回收具特异性的清晰甲基化修饰片段进行测序、比对分析并筛选基因；利用荧光定量PCR对筛选基因进行定量分析。结果显示：(1)利用15对引物进行扩增实验,平均每个个体外套膜3个区域能够产生(1163.25±124.34)条清晰可辨的条带,其中Me、Mp和Mc分别得到(401.00±40.37)条、(380.63±52.39)条和(381.63±53.57)条扩增条带,各组织甲基化总条数差异不显著(P>0.05)； Me、Mp和Mc的基因组甲基化水平分别为(17.07±2.19)%、(15.48±2.34)%和(19.61±2.88)%, Mc和Mp具有显著性差异(P<0.05)；组织间的基因组甲基化水平由高到低排列依次是Mc > Me > Mp。(2)对特异性片段进行回收、测序后,经在线及本地Blast比对,得到8条存在甲基化修饰的基因序列,其中3条有同源序列,基因注释为40S核糖体蛋白SA (40S ribosomal protein SA)、iHog (interference hedgehog)、锌指蛋白(zinc finger protein castor)。iHog仅在中央膜上具有全甲基化修饰,且E值较低,为筛选的目的基因。(3)荧光定量结果表明iHog在Me、Mp和Mc中均有表达,以Me表达量最高, Mc表达量最低,差异显著(P<0.05)。我们推测iHog的DNA序列的甲基化修饰抑制了该基因在Mc组织中的表达。综上研究结果表明,马氏珠母贝外套膜3个区域的甲基化修饰水平不一,且DNA甲基化在基因表达调控中具有作用,这对深入研究珍珠贝生物矿化和免疫反应机制具有一定的参考意义。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王庆恒	广东海洋大学水产学院	96	809	17.0	24.0
3	邓岳文	广东海洋大学水产学院	98	873	18.0	25.0
5	罗少杰	广东海洋大学水产学院	18	50	5.0	7.0
6	焦钰	广东海洋大学水产学院	49	148	7.0	11.0
10	郑哲	广东海洋大学水产学院	33	43	4.0	6.0