云南省恶性疟原虫青蒿素耐药性相关基因K13 kelch结构域序列多态性的分析

• 作者: 孙艾明 徐艳春 毛祥华 王剑 董莹 邓艳 陈梦妮
• 来源期刊: 中国寄生虫学与寄生虫病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 恶性疟原虫 青蒿素 耐药性 基因 多态 分析 云南省
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 339-345
• 分类号: R382.312
• 语种: 中文

摘要

目的 分析云南省恶性疟现症病例中恶性疟原虫(Hasmodium falciparum)K13基因kelch结构域的序列多态性,为掌握云南省恶性疟青蒿素耐药性提供依据. 方法 2013年1月-2015年12月,从云南省16个州(市)收集恶性疟现症病例的滤纸血样和相关信息,通过流行病学调查判定其感染来源,根据中国疾病预防控制信息系统疫情登记确认病例发现地.使用巢式PCR扩增恶性疟原虫K13基因kelch结构域并测序,与恶性疟原虫标准株3D7 (PF3D7_1343700)序列进行比对.使用Mega 5.04分析序列多态,计算序列间变异位点、遗传距离等,计算氨基酸突变位点构成比并进行x2检验. 结果 2013-2015年共收集恶性疟现症病例血样202例,190例为输入性病例,12例为云南本地感染病例,各年的病例构成比分别为30.7％ (62/202)、34.2％ (69/202)和35.1％ (71/202),呈逐年增多趋势.192例血样K13基因kelch结构域巢式扩增阳性,190例测序成功,66例存在K13基因错义突变,突变率为34.7％ (66/190).各年的突变病例检出构成比分别为40.9％ (27/66)、37.9％(25/66)和21.2％ (14/66),呈逐年减少趋势.共检出F446I、A578S、N458Y、P574L、A676D、G449A、C469Y、V566I、E556D和S16L等10种突变型,突变率最高的为F446I,占72.7％ (48/66).F446I突变型在18 ～56岁、农民、感染地为东南亚等病例中的检出比例分别为58.3％ (28/48)、70.8％ (34/48)和91.7％ (44/48),高于同组其他病例的41.7％ (20/48)、29.2％ (14/48)和8.3％ (4/48) (x2=4.633、5.556、5.152,P＜0.05).190例K13基因kelch结构域的同源性片段为248 bp,其中保守位点占94.8％ (235/248),变异位点占5.2％ (13/248),简约信息位点占2.0％ (5/248),单态位点占3.2％ (8/248).190例DNA序列间遗传距离为0.000～0.036,平均为(0.001±0.001). 结论 云南省恶性疟现症病例的K13基因kelch结构域存在10种突变型,以F446I位点突变最常见.