抑制miR-181a对鱼藤酮诱导的SH-SY5Y多巴胺能细胞损伤的保护作用

• 作者: 周静 张保朝 温昌明
• 来源期刊: 神经解剖学杂志
• 关键词: miR-181a 鱼藤酮 多巴胺能 SH-SY5Y
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 原著
• 页码范围: 262-268
• 语种: 中文
• DOI: 10.16557/j.cnki.1000-7547.2016.02.021

摘要

目的:通过抑制miR-181a表达研究其对鱼藤酮诱导SH-SY5Y的细胞损伤、内质网应激以及未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)的影响,为miR-181a在帕金森病治疗方面提供初步的实验依据.方法:不同浓度的鱼藤酮诱导SH-SY5Y作用12、24、48、72 h;miR-181a类似物和miR-181a抑制剂及0.4 μmol/L鱼藤酮诱导SH-SY5Y作用24h;采用CCK-8法检测细胞存活率;Annexin V/PI双染检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测miR-181a与葡萄糖调节蛋白78 (glucose regulated protein 78 kD,GRP78)的靶标关系;qRT-PCR检测miR-181a和GRP78 mRNA表达水平;Western Blot检测GRP78、肌醇需酶1α(inositol-requiring enzyme 1,IRE1α)、X-盒结合蛋白1(X box-binding protein 1,XBP1)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein-homologous protein,CHOP)的蛋白表达水平.结果:(1)CCK-8结果显示:随着鱼藤酮浓度(＞0.1 μmol/L)增加,SH-SY5Y存活率降低,并存在浓度和时间依赖性;其中0.4 μmol/L作用24h后存活率已降为0.6(P＜0.05),加入miR-181a抑制剂后细胞存活率升高达0.8(P ＜0.05);(2)Annexin V/PI双染结果显示:抑制miR-181a表达,细胞的凋亡降低至0.23(P ＜0.05);(3)双荧光素酶报告基因检测显示:miR-181a与GRP78存在直接的靶标关系;(4) qRT-PCR结果显示:0.4 μmol/L鱼藤酮作用24 h后细胞miR-181a呈高表达(P＜0.05),抑制miR-181a表达可上调GRP78 mRNA水平(P＜0.05);(5)Western Blot结果显示:抑制miR-181a表达可上调GRP78和下调pIRE1α、XBP1和CHOP的蛋白表达(P＜0.05).结论:抑制miR-181a表达可减轻鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞损伤,其机制可能通过上调GRP78进而调节内质网应激以及抑制UPR相关信号通路,从而发挥对神经元细胞的保护作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	温昌明	南阳市中心医院神经内科	31	169	7.0	12.0
2	张保朝	南阳市中心医院神经内科	104	432	11.0	17.0
3	周静	南阳市中心医院神经内科	11	62	3.0	7.0