利用RNA干扰技术沉默稻纵卷叶螟几丁质合成酶A基因

• 作者: 李娇 李尚伟 杜娟
• 来源期刊: 山地农业生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: RNA干扰 稻纵卷叶螟 几丁质合成酶A基因 双链RNA
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 专家特稿
• 页码范围: 10-17,62
• 页数: 9页
• 分类号: Q966
• 字数: 6797字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15958/j.cnki.sdnyswxb.2016.03.001

摘要

稻纵卷叶螟(Cnaphalocrocis medinalis)是一种主要的水稻害虫,几丁质合成酶是昆虫体内几丁质合成通路中的一个关键酶,在昆虫生长发育中具有重要作用,是控制害虫的理想靶标。本文采用 RNA 干扰(RNAi)技术,以稻纵卷叶螟几丁质合成酶 A 基因(CmCHSA)为靶标,设计两个靶位点 CmCHSA-I 和 CmCHSA-II,在体外分别合成其双链 RNA(dsRNA),用显微注射法导入3龄幼虫体内,然后通过表型观察和荧光定量 PCR(RT-qPCR)检测干扰效应。结果表明,注射两种 dsRNA 后纵卷叶螟对水稻的取食明显下降,生长发育阻滞,虫体变小变黑和畸形,有的出现死亡。 RT-qPCR 表明,注射 CmCHSA-I 和 CmCHSA-II 两种 dsRNA 在96 h 后,CmCHSA 的表达量相比对照分别下降了59％和64％。注射 CmCHSA-I 和 CmCHSA-II 两种 dsRNA 7 d 后,稻纵卷叶螟的死亡率分别为80％和83.33％,与对照组相比,分别增加了66.67％和70％。本研究用注射法 RNAi 技术成功实现了对稻纵卷叶螟几丁质合成酶 A 基因的沉默,为利用该技术研究昆虫基因的功能,以及通过转基因 RNAi 技术防治稻纵卷叶螟奠定了基础。