β-catenin过表达鼻咽癌CNE2细胞模型的构建

• 作者: 何火聪 林可焴 苏颖 邹长棪 陈超
• 来源期刊: 中国癌症防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 鼻咽肿瘤 真核表达载体 β-catenin 细胞模型
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 201-206
• 页数: 6页
• 分类号: R739.6
• 字数: 4539字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-5671.2016.04.01

摘要

目的 构建β-catenin真核表达载体pc DNA3.1(+)/β-catenin并转染鼻咽癌CNE2细胞,检测β-catenin在CNE2细胞中的表达.方法 反转录-聚合酶链式扩增反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增目的基因β-catenin,胶回收纯化后克隆至pGEM-T Easy载体,挑选阳性克隆,抽提质粒进行kpn Ⅰ/xba Ⅰ双酶切和PCR鉴定,用T4 DNA连接酶将目的基因β-catenin与真核表达载体pcDNA3.1/Hygro(+)连接,构建重组的真核表达载体pcDNA3.1(+)/β-catenin,转化感受态细胞DH5α,再次抽提质粒进行PCR、kpn Ⅰ/xba Ⅰ双酶切和测序鉴定,然后用FuGENE HD将纯化的pcDNA3.1(+)/β-catenin转染入鼻咽癌CNE2细胞,经Hygromycin B筛选,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法(Western blot)验证转染细胞CNE2/β-catenin中β-catenin的表达.结果 PCR、双酶切及测序鉴定表明,成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)/β-catenin;实时荧光定量PCR和Western blot检测表明,与未转染细胞CNE2比较,被转染的CNE2/β-catenin细胞能够上调目的基因β-catenin的表达(P＜0.01).结论 成功构建真核表达载体pc DN A3.1(+)/β-catenin,并能在转染的CNE2/β-catenin细胞上调目的基因β-catenin的表达.