尾型同源盒转录因子2shRNA慢病毒表达载体的构建及其转染对结肠癌细胞生长的影响

• 作者: 余钧辉 孙学军 李孝斌 王孝珑 王训凯 郑见宝
• 来源期刊: 中国普通外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 结肠肿瘤 基因,同源盒 RNA干扰
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 529-534
• 分类号: R735.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3978/j.issn.1005-6947.2016.04.011

摘要

目的:构建尾型同源盒转录因子2 (CDX2) shRNA慢病毒表达载体,并观察下调CDX2基因其对结肠癌细胞生长的影响.方法:根据CDX2mRNA序列设计shRNA,并合成shRNA的互补序列,通过连接酶链接到GV248载体上,用测序方法鉴定阳性克隆后,将构建好的慢病毒表达载体与慢病毒包装载体用Lpofectamine 2000共转染293T细胞,产生慢病毒颗粒并用稀释法进行滴度测定.将CDX2shRNA慢病毒表达载体转染人结肠癌细胞SW480、HT29后,分别用qRT-PCR和Western blot检测CDX2 mRNA及蛋白水平,CCK8实验及克隆形成实验检测细胞增殖能力.结果:DNA测序鉴定证实,CDX2shRNA表达片段正确插入GV248载体中,包装后的病毒滴度为1×109 TU/mL;SW480、HT29细胞转染CDX2-shRNA慢病毒表达载体后,CDX2 mRNA及蛋白表达水平均明显降低(均P＜0.05),但细胞的增殖与克隆形成能力无明显改变(均P＞0.05).结论:成功构建shRNA慢病毒表达载体,其转染结肠癌细胞后能有效地抑制CDX2基因的表达;下调CDX2基因对人结肠癌细胞的增殖无明显影响.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑见宝	西安交通大学第一附属医院普通外科	48	185	7.0	10.0
2	孙学军	西安交通大学第一附属医院普通外科	116	617	12.0	19.0
3	余钧辉	西安交通大学第一附属医院普通外科	7	26	4.0	5.0
4	王孝珑	西安交通大学第一附属医院普通外科	5	5	1.0	2.0
5	王训凯	西安交通大学第一附属医院普通外科	1	1	1.0	1.0
6	李孝斌	西安交通大学第一附属医院普通外科	2	1	1.0	1.0