shRNA慢病毒表达载体对人结肠癌细胞CXCR7表达的影响

• 作者: 成伟 杨开焰 王红鲜 胡桂 陈道瑾
• 来源期刊: 中国普通外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 结肠肿瘤 慢病毒 CXCR7 shRNA 转染
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 156-161
• 页数: 6页
• 分类号: R735.3
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨CXCR7的shRNA慢病毒表达载体对人结肠癌细胞HT-29 CXCR7表达的影响.方法 设计CXCR7的3条siRNA的靶点序列,合成含干扰序列的双链DNA发卡结构shRNA,分别与双酶切后的plVTHM载体连接,构建3种重组穿梭质粒plVTHM shRNA1,plVTHM shRNA2和plVTHM shR-NA3,并转化于DH5α感受态细胞,Amp筛选阳性克隆,抽取质粒行酶切鉴定并测序.分别将3种重组质粒与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,生产慢病毒颗粒,并检测病毒滴度.将3种重组慢病毒及阴性对照病毒分别感染人结肠癌细胞HT-29,实时定量PCR和Western blot分别检测CXCR7 mRNA和蛋白的沉默效果.结果 酶切鉴定及测序结果 证实3种慢病毒载体均包装成功,滴度分别为6×107 TU/mL,4×107 TU/mL和5×107 TU/mL.感染HT-29后,CXCR7 mRNA及蛋白的表达量均较阴性对照组和未感染组明显降低(P＜0.05);其中以LV-CXCR7 shRNA-2和LV-CXCR7 shRNA-3作用显著,mRNA表达分别下调72%和67%,蛋白表达下调68%和55%(P＜0.05);而阴性感染对照组和未感染组相比差异无统计学意义(P＞0.05)结论 成功构建了3种CXCR7 shRNA慢病毒表达,可有效下调HT-29细胞CXCR7mRNA和蛋白的表达,其为进一步研究以CXCR7为靶点的结肠癌基因治疗提供稳定转染细胞的载体奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈道瑾	中南大学湘雅三医院普通外科	98	786	14.0	22.0
2	杨开焰	中南大学湘雅三医院普通外科	24	98	6.0	8.0
3	胡桂	中南大学湘雅三医院普通外科	19	102	5.0	9.0
4	成伟	中南大学湘雅三医院普通外科	5	37	3.0	5.0
5	王红鲜	中南大学湘雅三医院普通外科	4	32	3.0	4.0