金霉素生物合成基因簇中调控基因ctcB的功能

• 作者: 刘佳 刘运添 孔令新 朱涛 王松梅 王鹏飞 由德林 谢昌贤 邓子新
• 来源期刊: 微生物学报
• 关键词: 金霉素 SARP家族转录调控基因 基因敲除 生物合成
• 年，卷（期）: 2016,（9）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1486-1495
• 语种: 中文
• DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20150592

摘要

[目的]研究金霉素产生菌中SARP家族转录调控基因ctcB的作用.[方法]利用大肠杆菌、链霉菌的属间接合转移和同源重组双交换的方法,构建ctcB基因缺失突变株.通过cDNA在相邻同转录方向的基因间隔进行PCR验证,确定金霉素生物合成基因簇中的转录单元.利用荧光定量RT-PCR方法进行突变株金霉素生物合成基因簇的转录水平检测.随后,生物信息学预测分析了金霉素生物合成基因簇内CtcB与DNA的结合位点.[结果]获得了ctcB基因缺失的双交换突变株.发酵结果显示,该突变株失去产生金霉素与四环素的能力.金霉素生物合成基因簇内有6个共转录单元,其中4个共转录单元在ctcB基因缺失突变株中转录水平明显下降.软件分析预测到一致性较高的CtcB结合重复序列.[结论]ctcB正调控金霉素生物合成结构基因ctcG-D、ctcH-K、ctcN-P、ctcW-T4个转录单元和ctcQ,为进一步研究ctcB调控机制奠定了基础.