摘要:
目的:研究脓毒症患者外周血T淋巴细胞亚群和T淋巴细胞凋亡的变化,探讨其在免疫抑制和预后中的作用.方法:收集2014年10月至2015年12月重庆医科大学附属第一医院ICU收治的脓毒症患者55例,随访患者28 d生存率,根据预后不同,分为脓毒症患者存活组和脓毒症患者死亡组;同时收集健康志愿者30例为对照组.应用流式细胞仪检测患者外周血T细胞亚群计数,分析其与APACHEⅡ评分及预测死亡危险率(R)的相关性;用免疫磁珠分选外周血CD3+T淋巴细胞,通过流式细胞技术和Tunel法检测细胞凋亡.用脓毒症患者和健康志愿者血清体外刺激Jurkat细胞24 h,采用流式细胞技术和Tunel染色法检测细胞凋亡,Western blot法检测激活型天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(cleaved-easpase 3),B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和髓样细胞白血病-1(myeloid cell leukemia l,Mcl-1)蛋白表达水平.结果:脓毒症患者存活组、死亡组T淋巴细胞各亚群绝对值计数均明显低于对照组,分别为:CD3+ 374.0(274.5~514.0)、154.0(87.5~256.2)、1534.5(1255.0~1756.7),CD3 +CD4+ 198.0(148.5 ~299.0)、68.0(37.7~108.5)、766.5 (629.3~923.5),CD3+CD8+ 142.0 (89.0~184.0)、76.0(48.7~134.5)、600.5(400.2~717.0)(全部P<0.05);脓毒症患者死亡组CD3+、CD3+CD4+细胞计数减少均较脓毒症患者存活组更显著,差异具有统计学意义(P=0.011,P=0.005).脓毒症患者死亡组外周血T淋巴细胞中CD3+CD4+细胞占(42.40±5.71)%,较对照组(53.46±9.28)%明显减少(P=0.003);CD3+CD8+细胞占(54.40±4.76)%,较对照组(39.33±7.26)%增加(P=-0.003);CD4+/CD8+比值为(0.79±0.17),较对照组(1.44±0.51)明显下降(P=0.023).CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+比值与患者APACHEⅡ评分和R均呈负相关关系(全部P<0.05).脓毒症患者存活组、死亡组CD3+T淋巴细胞凋亡率分别为(15.59±0.54)%、(39.57±4.49)%,较对照组(9.53±1.91)%明显增加(P=0.040,P=0.000),脓毒症患者死亡组较脓毒症患者存活组增加更明显(P=0.000).脓毒症患者存活组、死亡组血清诱导Jurkat细胞凋亡率分别为(16.60±3.55)%、(32.93±5.89)%,较对照组(8.56±0.89)%明显增加(P=-0.049、P=-0.000);Cleaved-caspase3蛋白水平(2.01±0.21,2.68±0.28)较对照组(1.00±0.00)上调(P=-0.001、P=0.000);抗凋亡蛋白Mcl-1(0.77±0.03,0.61±0.01)、Bcl-2 (0.68±0.07,0.48±0.03)较对照组(1.00±0.00)明显下调(P=0.000、P=0.000) (P=0.000、P=0.000);与脓毒症患者存活组比较,脓毒症患者死亡组中Jurkat细胞凋亡、Cleaved-caspase3、Mcl-1、Bel-2变化更加为明显(P=0.002,P=0.007、P=0.000、P=0.001).结论:脓毒症患者免疫失衡,T淋巴细胞凋亡增加,T淋巴细胞数明显减少,发生免疫抑制,且与病情严重程度和预后密切相关.