一种用于宽场荧光显微镜下成像的皮肤厚片免疫荧光染色方法

• 作者: 丁有权 任弘毅 李轩漾 齐建国
• 来源期刊: 解剖学报
• 学科: 医学
• 关键词: 皮肤 二甲基亚砜 厚组织切片 组织光学透明 宽场荧光显微术 免疫荧光 大鼠
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 703-708
• 分类号: R329-33
• 语种: 中文
• DOI: 10.16098/j.issn.0529-1356.2016.05.023

摘要

目的 通过改良免疫荧光染色方案,使皮肤厚切片能在宽场荧光显微镜下荧光成像.方法 选择成年雄性SD大鼠5只,经Zamboni固定液灌注固定后取后肢足底皮肤,冷冻切片,片厚40μm,行神经纤维标志物PGP9.5免疫荧光染色.首先比较染色后用梯度甘油溶液透明与不经甘油透明对皮肤厚片成像深度的影响;继之在染色后甘油透明的基础上,检测染色前二甲基亚砜(DMSO)处理不同时间(10min、15min和30min)对皮肤背景信号的影响.此外,采用体视显微镜检测梯度甘油透明对切片形态的影响.最后,用上述DMSO-甘油改良染色法进一步对神经纤维其他标志物NF 200和外周蛋白分别进行染色.结果 经染色后甘油透明的切片其成像深度显著大于常规染色的切片(P＜0.01);在甘油透明的基础上,先用DMSO处理能有效降低皮肤背景着色,时间以15min为佳;梯度甘油处理并不会造成皮肤厚片的形态改变;DMSO-甘油改良染色法也能有效显示皮肤NF200和外周蛋白免疫反应阳性的神经纤维.结论 经本改良方法染色的皮肤厚片能在宽场荧光显微镜下良好成像.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	齐建国	四川大学华西基础医学与法医学院组织学胚胎学与神经生物学教研室	41	238	8.0	14.0
2	任弘毅	四川大学华西基础医学与法医学院组织学胚胎学与神经生物学教研室	7	13	1.0	3.0
3	丁有权	四川大学华西基础医学与法医学院组织学胚胎学与神经生物学教研室	9	22	2.0	4.0
4	李轩漾	四川大学华西基础医学与法医学院组织学胚胎学与神经生物学教研室	3	3	1.0	1.0