斧文蛤金属硫蛋白基因的克隆与表达分析

• 作者: 刘广绪 林兴管 柴雪良 滕爽爽 程雪艳 肖国强 蒋国萍
• 来源期刊: 水生生物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 斧文蛤 金属硫蛋白 基因克隆 表达分析 Cd2+
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 页码范围: 914-920
• 页数: 7页
• 分类号: S917.4
• 字数: 5149字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7541/2016.05.118

摘要

金属硫蛋白(Metallothionein,MT)是.类富含半胱氨酸的小分子蛋白质,参与机体重金属解毒、维持金属元素代谢平衡以及清除自由基等生理功能.为了解斧文蛤金属硫蛋白(M1-MT)的分子生物学特征及其在重金属Cd2+胁迫下的响应机制,本文采用RACE技术从斧文蛤(Meretrix lamarckii)总RNA反转录产物中获得了636 bp的M1-MT cDNA基因序列.该序列包含65 bp的5'非编码区(UTR)和340 bp的3'非编码区(UTR)以及231 bp的开放阅读框(ORE),可编码76个氨基酸;其中半胱氨酸占27％,不含芳香族氨基酸,含16个MT所特有的Cys-Xn-Cys结构,预测的分子量约为7.704kD,理论等电点7.138.MT氨基酸序列比对分析表明:斧文蛤金属硫蛋白(M1-MT)与丽文蛤(Meretrix lusoria)的相似性高达88％,与文蛤(Meretrix meretrix)的同源性为87％.实时荧光定量(qRT-PCR)检测MT在斧文蛤5种组织中均有表达,但存在组织特异性,其中内脏团表达量最高,其次依次为鳃丝、闭壳肌、外套膜、斧足.在Cd2+(0.13 mg/L)胁迫0、6h、12h、24h、48h、72h和96h下,斧文蛤内脏团MT现出不同程度的上调表达,具体表现为“高-低-高-低”的波浪式变化,除6h以外,其他时间点均与对照组存在极显著差异(P＜0.01).本研究表明:MT基因在维护机体正常生理功能及斧文蛤抵御重金属Cd2+胁迫过程中发挥着重要的分子调控作用.