1型1-磷酸鞘氨醇受体的siRNA对人涎腺导管上皮细胞的作用

• 作者: 常志芳 庞春艳 李琼 杨国安 王永福
• 来源期刊: 北京大学学报医学版
• 关键词: 受体,鞘磷脂 RNA,小分子干扰 涎腺 腺泡细胞 遗传载体
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 987-993
• 页数: 7页
• 分类号: R593.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-167X.2016.06.012

摘要

目的:构建靶向1型1-磷酸鞘氨醇受体(sphingosine 1-phosphate receptor-1,S1P1)基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)慢病毒表达载体,感染干燥综合征细胞模型——人涎腺导管上皮细胞(human salivary gland cells,HSG),探讨S1P1的siRNA治疗干燥综合征的可能性,为临床靶标治疗提供广阔的思路.方法:实验分空白组、空载体组、scramble-siRNA组及S1 P1-siRNA组,分别将pLL3.7空载体、构建成功的scramble-siRNA及S1P1-siRNA慢病毒表达载体与pMD2.G、pMDL g/p RRE、pRSV-REV共转染293T细胞制备病毒,感染HSG细胞株48 h,流式细胞术检测其感染效率,实时荧光定量RT-PCR法检测HSG细胞中S1P1 mRNA的表达水平,细胞免疫组织化学法检测细胞中S1P1蛋白的表达水平,ELISA法检测细胞上清中γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)和白细胞介素(interleukin,IL)-17的表达水平.结果:(1)成功构建scramble-siRNA、S1 P1-siRNA慢病毒表达载体,慢病毒的滴度约为3.5×108 TU/mL.(2)感染48 h后S1P1-siRNA组HSG细胞中S1P1mRNA的表达水平明显低于空白组、空载体组和scramble-siRNA组,差异有统计学意义(P＜0.05).(3)S1P1-siRNA组HSG细胞中S1P1蛋白的表达水平低于空白组、空载体组和scramble-siRNA组,差异有统计学意义(P＜0.05).(4) S1P1-siRNA组HSG细胞分泌的IL-17的浓度明显降低,与空白组、空载体组和scramble-siRNA组比较差异有统计学意义(P＜0.05).(5) S1P1-siRNA组细胞上清液中IFN-γ的浓度降低,与空白组、空载体组和scramble-siRNA组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:成功构建了靶向S1P1基因的慢病毒载体,S1P1 siRNA可以使S1P1 mRNA和蛋白表达水平下降,细胞上清液中IL-17和IFN-γ的浓度下降,证明S1P1 siRNA可转染HSG细胞且特异、高效地抑制S1P1基因的表达,抑制细胞上清液中细胞因子的表达,为治疗干燥综合征奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	庞春艳	包头医学院第一附属医院风湿免疫科	18	69	4.0	7.0
3	常志芳	包头医学院第一附属医院风湿免疫科	13	53	4.0	7.0
4	李琼	包头医学院第一附属医院风湿免疫科	3	5	2.0	2.0
5	杨国安		3	2	1.0	1.0