不同培养体系对猪胚胎多能样干细胞分离培养的影响

• 作者: 俞晓丽 刘晓鹏 成德 王华岩 王宁 马洋洋
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 猪 孤雌胚胎(PA) 八聚体结合转录因子4(OCT4) 多能干细胞 分离培养
• 年，卷（期）: 2016,（9）
• 所属期刊栏目: 专题:动物干细胞与胚胎工程
• 页码范围: 1429-1438
• 分类号: Q254|Q813.11
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2016.09.017

摘要

为深入研究猪(Sus scrofa)胚胎干细胞(porcine embryonic stem cells,pESCs)分离培养自我更新和分化潜能,本研究利用不同培养条件,从孤雌胚胎(parthenogenetic embryos,PA)、细胞核移植胚胎(somatic cell nuclear transfer,SCNT)和体内受精胚胎(in vivo-produced,IVP)中分离pESC样细胞.对PA和SCNT胚胎的培养条件和关键多能基因进行检测,比较培养液中添加白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)、人碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、糖原合成酶激酶3β抑制剂(inhibitors of glycogen synthase kinase 3β,CHIR99021)和有丝分裂原激活蛋白激酶l(mitogenactivated protein kinase 1,PD0325901)对分离pESCs的影响.结果显示,猪受精卵培养基3(porcine zygote medium 3,PMZ3)适合PA胚胎的发育,NCSU23培养基适合SCNT胚胎的发育.在PA和SCNT囊胚胎中,多能基因八聚体结合转录因子4 (octamer-binding transcription factor 4,OCT4)的表达量比提尔纳瑙伊(Tir na n-Og,NANOG)和性别决定区Y-box 2(sex determining region Y-box 2,SOX2)显著高;碱性成纤维细胞生长因子受体(basic fibroblast growth factor receptor,bFGFR)基因的表达显著上调,表明从PA和SCNT囊胚胎中分离pESCs需要同时添加bFGF.另外,通过添加bFGF,提高了从体内胚胎分离pESCs克隆的效率.细胞形态呈外胚层样干细胞,免疫荧光检测有NANOG和SOX2的表达,碱性磷酸酶检测阳性.本研究为分离pESCs提供了参考数据和方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王宁	西北农林科技大学动物医学院	27	254	9.0	15.0
2	王华岩	西北农林科技大学动物医学院	21	67	5.0	7.0
3	成德	西北农林科技大学动物医学院	5	22	2.0	4.0
4	俞晓丽	西北农林科技大学动物医学院	1	2	1.0	1.0
5	刘晓鹏	西北农林科技大学动物医学院	3	11	2.0	3.0
6	马洋洋	西北农林科技大学动物医学院	3	5	2.0	2.0