Delftia sp . T3-6酰胺水解酶DamH晶体制备及X-射线衍射分析

• 作者: 吴晓玉 崔中利 张碧滢 王秀玲 王飞 赵晓艳
• 来源期刊: 江西农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 酰胺水解酶 纯化 结晶条件优化 X-射线衍射
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 生物技术与工程
• 页码范围: 1154-1160
• 页数: 7页
• 分类号: Q936
• 字数: 3904字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13836/j.jjau.2016162

摘要

DamH是菌株Delftia sp. T3-6产生的具有酯键水解活性的酰胺酶,对其原核表达、纯化、结晶条件及蛋白晶体X-射线衍射条件进行了研究。经过原核表达,采用Ni-NTA亲和层析法和透析法纯化蛋白,成功获得了适合晶体生长的蛋白DamH。289 K下采用座滴气相扩散法进行晶体筛选和制备,在蛋白浓度为15 mg/mL及含有0.2 mol/L乙酸铵,pH 7.1,21%( W/V)聚乙二醇3350的缓冲液中获得了理想的蛋白晶体。在低温100 K下通过X-射线衍射仪( Rigaku MicroMax-007 HF)收集了晶体衍射数据。晶体衍射分辨率为3.4?,空间群为三斜晶系P1,晶胞参数为a=14.1?,b=23.9?,c=85.7?,α=112.6°,β=77.2°,γ=89.1°。结晶条件的优化和晶体制备为Delftia sp. T3-6 DamH高分辨率晶体制备提供了参考,晶体衍射数据的收集为DamH三维结构的解析奠定了前期基础,将有助于阐明DamH的催化机制。