转化生长因子β1受体抑制剂SD-208对人增生性瘢痕的作用

• 作者: 俞为荣 倪涛 姚敏 方勇 李明 杨鹏高 毛志刚 顾钏
• 来源期刊: 中华烧伤杂志
• 关键词: 瘢痕 转化生长因子β1 细胞增殖 细胞运动 微丝 SD-208
• 年，卷（期）: 2016,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究热点
• 页码范围: 389-395
• 页数: 7页
• 字数: 4899字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-2587.2016.07.002

摘要

目的 探讨TGF-β1受体抑制剂SD-208对人增生性瘢痕的作用及其机制. 方法 取废弃人增生性瘢痕组织,分离瘢痕Fb,并进行传代培养,采用第5代细胞进行以下实验.(1)按照随机数字表法(分组方法下同)将细胞分为空白对照组及0.5、1.0、3.0、5.0 μmol/L SD-208组,每组6孔.空白对照组加入1 μL PBS,后4组分别加入1μL 0.5、1.0、3.0、5.0μmol/L SD-208,培养12 h,细胞计数试剂盒8及酶标仪检测细胞增殖活性(以吸光度值表示).根据细胞增殖活性结果选取适宜物质的量浓度的SD-208用于后续实验.(2)另取细胞,分为空白对照组及1、3μmol/L SD-208组,同(1)处理,每组8孔,Transwell法检测迁移细胞数.(3)另取细胞,同(2)分组处理,罗丹明-鬼笔环肽染色,观察细胞微丝形态.(4)另取细胞,同(2)分组处理,蛋白质印迹法检测TGF-β1蛋白表达.(5)取48只BALB/c裸鼠,分为生理盐水组24只与1μmol/L SD-208组24只,于背部做长度为1 cm的纵行切口,埋置人增生性瘢痕组织块.伤后7d,生理盐水组与1μmol/L SD-208组裸鼠瘢痕内分别多点注射0.05 mL生理盐水及1μmol/L SD-208,每日注射1次.于首次给药后0(当日)、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20 d,取8只裸鼠,电子秤称量体质量;用游标卡尺测量瘢痕面积,计算剩余瘢痕面积百分比.于首次给药后1、2、3周,取出人增生性瘢痕组织块,免疫组织化学染色法检测TGF-β1蛋白表达.对数据行单因素方差分析、两独立样本t检验. 结果 (1)空白对照组及0.5、1.0、3.0、5.0 μmol/L SD-208组细胞增殖活性分别为1.00±0.03、0.90±0.08、0.68±0.11、0.54±0.04、0.42±0.09,0.5、1.0、3.0、5.0 μmol/L SD-208组细胞增殖活性均明显低于空白对照组(t值为2.9 ～22.1,P ＜0.05或P＜0.01).(2)1、3μmol/L SD-208组迁移细胞数均明显少于空白对照组(t值分别为6.5、6.4,P值均小于0.01).(3)与空白对照组比较,1、3μmol/L SD-208组细胞的微丝荧光强度减弱,伪足伸出减少.(4)空白对照组及1、3 μmol/L SD-208组细胞TGF-β1蛋白表达量分别为1.00±0.08、0.80±0.08、0.61±0.05,l、3μmoL/L SD-208组细胞TGF-β1蛋白表达量均明显低于空白对照组(t值分别为4.0、9.2,P值均小于0.01).(5)生理盐水组、1μmol/L SD-208组裸鼠各时相点体质量相近(t值为0.2～1.1,P值均大于0.05).2组裸鼠剩余瘢痕面积百分比随给药时间延长降低,首次给药后6 ～20 d,1μmol/L SD-208组裸鼠剩余瘢痕面积百分比明显小于生理盐水组(t值为1.8～15.9,P＜0.05或P＜0.01).首次给药后1、2、3周,2组裸鼠体内人增生性瘢痕TGF-β1蛋白表达量均呈下降趋势,且1 μmol/L SD-208组裸鼠体内人增生性瘢痕TGF-11蛋白表达量明显低于生理盐水组(t值为6.2～19.1,P值均小于0.01). 结论 SD-208对人增生性瘢痕有明显的抑制作用,其作用机制与抑制内源性TGF-β1蛋白表达有关.