大白菜单拷贝序列的长片段 PCR 体系优化

• 作者: 王彦华 申书兴 苏建辉 赵建军 轩淑欣 魏利洁
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 大白菜 长片段 PCR 体系优化 单拷贝序列
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 页码范围: 51-56
• 页数: 6页
• 分类号: Q78|S634.03
• 字数: 3854字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.2016.04.009

摘要

目的：序列长片段 PCR 产物可作为 FISH 技术的有效探针进行分子细胞遗传学研究。然而，传统 PCR 技术对于5 kb 以上的长片段进行有效扩增很难。合适的反应条件及反应体系是进行长片段 PCR 有效扩增的必要前提。为了获得目的序列长片段 PCR 产物以用于 FISH 研究，根据大白菜 A03染色体顶端无重复序列区段设计了80对长片段 PCR 引物，从基因组 DNA 模板质量、dNTPs 浓度以及退火温度和延伸时间方面对 PCR 技术体系进行了优化。试验证明，选用幼苗嫩叶的基因组 DNA 和 LA Taq DNA 聚合酶可以提高长片段 PCR 引物的扩增质量和扩增效率；确定了适合5～15 kb 长片段 PCR 的反应体系为20μL：50 ng ／μL 模板 DNA 2μL，2．5 mmol ／L dNTPs 1．6μL，10μmol ／μL正反引物各1μL，10× LA PCR Buffer Ⅱ（含 Mg2＋）2μL，5 U ／μL LA Taq 酶0．2μL；反应条件为98℃变性15 s；58～64℃退火10 s，68℃延伸5 min，35个循环；68℃延伸10 min，4℃保存。在大白菜基因组中成功获得了60对5～15 kb的扩增片段。为在大白菜粗线期染色体上开展长片段 PCR-FISH 技术研究及在近缘种间开展比较染色体涂染揭示进化关系奠定了理论基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王彦华	河北农业大学园艺学院河北省蔬菜种质创新与利用重点实验室	79	1110	17.0	28.0
2	申书兴	河北农业大学园艺学院河北省蔬菜种质创新与利用重点实验室	168	1996	23.0	32.0
3	轩淑欣	河北农业大学园艺学院河北省蔬菜种质创新与利用重点实验室	56	693	16.0	23.0
4	魏利洁	河北农业大学园艺学院河北省蔬菜种质创新与利用重点实验室	1	0	0.0	0.0
5	苏建辉	河北农业大学园艺学院河北省蔬菜种质创新与利用重点实验室	1	0	0.0	0.0