BMP-14联合Noggin shRNA共转染对脂肪来源干细胞成骨分化能力的影响

• 作者: 丁涛 刘浩 孙振中 汤峰林 芮永军
• 来源期刊: 中国修复重建外科杂志
• 关键词: BMP-14 Noggin 慢病毒 共转染 脂肪来源干细胞 大鼠
• 年，卷（期）: 2016,（10）
• 所属期刊栏目: 干细胞与组织工程
• 页码范围: 1270-1275
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.7507/1002-1892.20160259

摘要

目的 在体外环境下同时下调细胞中Noggin基因和增加BMP-14基因,观察对脂肪来源干细胞(adipose derived stem cells,ADSCs)成骨分化能力的影响.方法 取健康成年SD大鼠5只,体质量250～300 g,采用Ⅰ型胶原酶消化法获取原代ADSCs,体外培养、扩增.使用慢病毒载体将目的基因转染大鼠ADSCs,根据目的基因不同将实验分为3组,A组为空载体病毒Lv-增强型绿色荧光蛋白转染对照组,B组为Lv-BMP-14转染组,C组为BMP-14+Noggin shRNA转染组.分别于转染后3、7、14d,采用实时荧光定量PCR检测BMP-14及成骨相关基因[Ⅰ型胶原、ALP、骨钙素(osteocalcin,OCN)]的表达,转染后14 d采用茜素红染色鉴定其成骨分化能力.结果 转染后3d,各组BMP-14 mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P＞0.05);7、14d,C组BMP-14 mRNA相对表达量高于A、B组,B组高于A组,比较差异均有统计学意义(P＜0.05).转染后3d,C组各成骨相关基因mRNA相对表达量显著高于A、B组(P＜0.05);A、B组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).转染后7、14 d,C组各成骨相关基因mRNA相对表达量显著高于A、B组,B组高于A组,除转染后7dA、B组间Ⅰ型胶原mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P＞0.05)外,其余各组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).转染后14 d茜素红染色示,A、B、C组钙结节量呈递增趋势.结论 BMP-14具有增强大鼠ADSCs向成骨细胞分化的能力;沉默细胞中的Noggin基因、联合BMP-14基因共同作用于大鼠ADSCs,其体外成骨分化能力明显强于BMP-14单基因转染,两者有显著的协同作用.