miR-302a对叶酸缺乏小鼠胚胎干细胞增殖和凋亡的影响

• 作者: 石伟 阳倩
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 医学
• 关键词: 叶酸 小鼠 胚胎干细胞 增殖 凋亡 miR-302a
• 年，卷（期）: 2016,（11）
• 所属期刊栏目: 论著?基础研究
• 页码范围: 1477-1480
• 页数: 4页
• 分类号: R363
• 字数: 3850字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2016.11.011

摘要

目的：探讨miR‐302a对叶酸缺乏小鼠胚胎干细胞（mESC）增殖和凋亡的影响。方法mESC分为完全培养基组（对照组），无叶酸培养基组（无叶酸组），无叶酸培养基＋miR‐302amimic组（miR‐302a组），通过RT‐PCR进行检测miR‐302a在完全培养基及无叶酸培养基中的表达。构建miR‐302amimic，后转染到无叶酸培养基mESC中，采用MTT法检测miR‐302amimic对mESC活力的影响，AnnexinV‐FITC／PI流式细胞术检测miR‐302amimic对mESC细胞凋亡的影响；流式细胞术检测miR‐302amimic对mESC细胞周期的影响；Westernblot检测及磷脂酰肌醇3羟激酶（PI3K）／蛋白激酶B（Akt）／哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路激活情况，以及下游分子细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、p21、p27表达的影响。结果RT‐PCR证实无叶酸组中miR‐302a表达量下降（P＜0．01）。与完全培养基比较，无叶酸培养基中，mESC细胞活力下降，细胞凋亡增加，细胞周期阻滞在G1期，Akt及mTOR磷酸化水平下降，CyclinD1表达下调，p21及p27表达上调，差异均具有统计学意义（P＜0．01）。与无叶酸组比较，miR‐302a组中，mESC细胞活力上升，凋亡下降，G1期缩短，AKT及mTOR磷酸化水平提高，CyclinD1表达上调，p21及p27表达下调，差异均具有统计学意义（P＜0．01）。结论miR‐302a类似物能显著抑制缺乏叶酸mESC凋亡，能促进其增值，与PI3K／AKT／mTOR信号通路有关。