香菇转录本Unigene 10627过氧化物酶结构域的克隆表达及抗氧化活性研究

• 作者: 刘奔 张伟 曹婧 李星云 王佳 王晓丽 郭雪芳 钟民涛 阮文静
• 来源期刊: 中国微生态学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 香菇C91-3 克隆 生物信息学 蛋白表达 抗氧化活性
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 275-279
• 分类号: R730.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.13381/j.cnki.cjm.201603008

摘要

目的 分析香菇C913转录本Unigene 10627基因的结构域,并对其进行诱导表达,初步探讨所得目的蛋白的抗氧化活性.方法 将香菇C913菌丝体中总RNA提取出来,通过反转录获得cDNA文库,根据反转录结果,通过3'-RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends),5'-RACE技术扩增获取基因全长.通过生物信息学方法预测基因的结构域,利用PCR技术扩增该目的片段,将扩增产物连接到原核表达载体pET32a(+)上,采用热转化法转至E.coli Rosetta-gami (DE3)中进行诱导表达,对目的蛋白进行分离、纯化及鉴定.采用二苯代苦味酰自由基(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl,DPPH)法检测蛋白的抗氧化活性.结果 成功获得基因全长,预测结果表明该基因具有染料脱色过氧化物酶结构域(DyPPerox),双酶切结果证实目的片段成功插入,并通过诱导表达获得目的蛋白.结论 目的蛋白成功表达,且具有抗氧化活性,为进一步研究其生物学活性提供基础.