刚地弓形虫MIC2突变体的构建及其特性分析

• 作者: 尹志奎 许娜 郑斌
• 来源期刊: 医学动物防制
• 学科: 医学
• 关键词: 刚地弓形虫 微线体蛋白2 点突变 GST pull-down
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 126-128
• 页数: 3页
• 分类号: R382.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.7629/yxdwfz201602003

摘要

目的 利用基因定点突变的方法将刚地弓形虫微线体蛋白2 (MIC2)的767位氨基酸的碱基定点突变,蛋白相互作用技术分析突变体的特性.方法 利用基因定点突变的方法,将MIC2蛋白羧基端(MIC2C)的767位色氨酸(tryptophan,W)的碱基突变为丙氨酸(alanine,A)的碱基,PCR扩增MIC2C W/A突变体基因片段;构建MIC2CW/A/pGEX-4T-1重组原核表达系统,IPTG诱导表达GST-MIC2C W/A突变体蛋白.以该蛋白和MIC2C蛋白(未突变蛋白)为探针蛋白与弓形虫裂解液进行GST pull-down实验,SDS-PAGE及Western blot分析.结果 获得了MIC2C W/A突变体基因片段,制备了GST-MIC2C W/A突变体蛋白;GST pull-down实验产物分析显示GST-MIC2CW/A蛋白的产物中未见蛋白条带,而未突变蛋白的产物中有一蛋白条带,且能被抗醛缩酶抗体识别.结论 在体外获得了MIC2突变体;MIC2突变体不能沉降弓形虫裂解液中的醛缩酶,即MIC2突变体失去了与醛缩酶作用的特性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	许娜		26	96	5.0	9.0
2	郑斌		29	105	7.0	9.0
3	尹志奎		43	171	8.0	10.0