刚地弓形虫DXR基因的克隆表达与生物学特性分析

• 作者: 何立 宗红英 章莹 蔡国斌
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 刚地弓形虫 DXR 克隆表达 膦胺霉素
• 年，卷（期）: 2016,（12）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1091-1095
• 页数: 5页
• 分类号: R382.5
• 字数: 3756字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2016.012.009

摘要

目的 对刚地弓形虫1-脱氧-D-木酮糖-5磷酸还原异构化酶(TgDXR)基因进行克隆、表达、纯化和生物学特性分析.方法 收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取cDNA和基因组DNA;PCR扩增TgDXR的基因片段;构建成熟TgDXR/pET 24b重组原核表达载体;经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆;在大肠杆菌BL21中用IPTG诱导表达.亲和层析纯化重组TgDXR蛋白,并对该蛋白的生物学特性和酶的动力学活性进行分析.结果 从弓形虫RH株的cDNA和基因组DNA中分别扩增出长度为1 542 bp和5 464 bp的TgDXR片段,成功构建重组质粒;SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠杆菌中高效表达.重组蛋白的相对分子量约50 kDa.酶活性实验显示,Mg2+、Mn2+是最佳金属螯合离子,反应最佳pH值为7.5,该酶活性抑制剂膦胺霉素(Fosmidomycin)对该酶蛋白的IC50为0.52 μmol/L.结论 RH株刚地弓形虫TgDXR可在原核表达系统中高效表达,该重组蛋白具有生物学活性,并有望作为弓形虫特异性药物靶标.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何立	武汉大学基础医学院人体寄生虫学教研室	59	210	9.0	11.0
2	章莹	武汉大学基础医学院医学遗传学系	9	38	4.0	6.0
3	蔡国斌	武汉大学基础医学院人体寄生虫学教研室	15	58	5.0	7.0
4	宗红英	武汉大学基础医学院人体寄生虫学教研室	5	17	2.0	4.0