刚地弓形虫P30两个不同片段的克隆、表达及鉴定

• 作者: 侯敏 刘剑南 姚永伟 张耀娟 章子豪 芦王英 褚宏亮 陈玲
• 来源期刊: 南京医科大学学报(自然科学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 刚地弓形虫 P30 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2004,（3）
• 所属期刊栏目: 病原生物学与免疫学研究专题
• 页码范围: 275-279
• 页数: 5页
• 分类号: R382.5
• 字数: 3013字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-4368.2004.03.026

摘要

目的:构建刚地弓形虫(简称弓形虫)主要表面抗原P30基因的2个不同片段的克隆并进行表达、鉴定.方法:根据已发表的弓形虫P30基因序列,参考有关文献设计合成两对引物,用PCR从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出P30基因的两个不同片段,分别构建T-A克隆,经PCR扩增及酶切鉴定后,进行测序,再亚克隆入pMAL-p2质粒并转化DH5α感受态细胞,于氨苄青霉素LB平板上初步筛选阳性克隆,再经酶切及PCR扩增鉴定重组子.将重组子转入表达菌BL21,用IPTG进行诱导表达,并对所表达的蛋白以western blot鉴定.结果:成功构建相应的T-A克隆及pMAL-p2亚克隆,经诱导、表达和鉴定,证实2个表达产物均为目的蛋白,其分子量分别为70和73Ku.结论:成功获得弓形虫主要表面抗原P30的2个表达产物,为其进一步的纯化及应用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	侯敏	南京医科大学病原生物学教研室	23	77	5.0	7.0
2	刘剑南	南京医科大学病原生物学教研室	11	35	4.0	5.0
3	章子豪	南京医科大学病原生物学教研室	24	117	7.0	8.0
4	陈玲	南京医科大学病原生物学教研室	37	168	8.0	11.0
5	芦王英	南京医科大学病原生物学教研室	8	51	3.0	7.0
6	姚永伟	南京医科大学病原生物学教研室	5	21	3.0	4.0
7	褚宏亮	南京医科大学病原生物学教研室	4	20	3.0	4.0