编码弓形虫表面抗原P30基因的克隆及在E.coli中的表达

• 作者: 占国清 吴少庭 李国光 林敏 郑春福 高世同
• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 弓形虫 表面抗原P30 基因重组 表达
• 年，卷（期）: 2003,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 31-33
• 页数: 3页
• 分类号: R382.5
• 字数: 2581字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2003.03.007

摘要

目的构建编码弓形虫RH株表面抗原P30基因重组表达质粒,初步观察P30基因在E.coli表达.方法将P30基因定向克隆到分支杆菌-大肠杆菌穿梭表达质粒热休克蛋白70(hsp70)起动基因的下游的多克隆位点,构建重组表达质粒pBCG-P30;采用亚克隆技术,将含P30和hsp70起动基因的复合片段,插入表达载体pBK-CMV质粒,转化大肠杆菌DH5a,在卡那霉素阳性LB培养基平板筛选阳性重组子,并经双酶切及PCR扩增鉴定.重组质粒pBK-P30转化大肠杆菌,IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE和Western boltting分析.结果1)阳性重组质粒pBCG-P30、pBK-P30经酶切和PCR鉴定,与预期的结果相符合.2)序列测定证实克隆的基因为编码P30抗原的基因.3)P30基因在大肠杆菌诱导表达后获得45kDa融合蛋白,此抗原未被弓形虫高免兔血清识别.结论成功构建编码弓形虫表面抗原P30重组表达质粒,并在大肠杆菌中获得表达,为弓形虫DNA疫苗的研制奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高世同		137	593	11.0	15.0
2	占国清	十堰市人民医院肝病研究室	5	68	4.0	5.0
3	吴少庭		72	281	9.0	12.0
4	郑春福	重庆医科大学寄生虫学教研室	20	134	7.0	11.0
5	李国光	同济医科大学流行病学教研室	5	72	4.0	5.0
6	林敏		5	33	3.0	5.0