弓形虫表面抗原P30基因分枝杆菌-大肠杆菌穿梭表达重组质粒的构建及序列测定

• 作者: 占国清 吴少庭 李国光 林敏 梁驹卿 郑春福 高世同
• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 弓形虫 表面抗原P30 基因重组 序列测定
• 年，卷（期）: 2000,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 28-31
• 页数: 4页
• 分类号: R382.5
• 字数: 2728字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2000.05.008

摘要

目的构建编码弓形虫RH株表面抗原P30基因的分枝杆菌-大肠杆菌穿梭表达重组质粒并进行其序列测定.方法弓形虫RH株腹腔接种小鼠,收集腹水,酚/ 氯仿法抽提基因组DNA;根据基因库P30 基因序列设计合成一对引物,采用PCR法扩增编码P30的基因片段,经低熔点琼脂糖法回收并纯化;将P30基因定向克隆到分枝杆菌-大肠杆菌穿梭表达质粒,转化大肠杆菌DH5dα,在卡那霉素阳性LB培养基平板筛选阳性重组子,并经双酶切及PC R 鉴定;最后对重组子进行序列测定.结果 PCR所扩增的P30基因片段为1037bp, 阳性重组质粒pBCG-P30经XbaI+KpnI双酶切,获得包含P30和热休克蛋白(hsp70)启动子的复合基因片段,此片段的大小为1170bp,与预期的理论值相符合.序列测定分析进一步表明所克隆的基因为编码P30抗原的基因片段.结论成功构建编码弓形虫表面抗原P30基因大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒pBCG-P30.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑春福		20	134	7.0	11.0
2	占国清	同济医科大学流行病学教研室	5	51	4.0	5.0
3	李国光	同济医科大学流行病学教研室	5	72	4.0	5.0
4	梁驹卿		13	82	6.0	9.0